琼脂糖微球 10B (分子筛SEC，抗体片段纯化)

一、   产品概述

琼脂糖微球 10B 是一款以高纯度琼脂糖为原料，通过反向悬浮乳化—交联技术制备的 10% 浓度琼脂糖球状层析介质，定位于小分子量蛋白、多肽与寡核苷酸的高分辨率凝胶过滤（尺寸排阻）分离，球蛋白分级范围为 1,000 ～ 300,000 Da。

凝胶过滤层析（尺寸排阻层析，Gel Filtration / Size Exclusion Chromatography）依据分子的流体力学体积（尺寸）差异进行分离：大于凝胶排阻极限的分子不能进入微球内部孔道，只能沿微球之间的空隙（外水体积，V₀）流经层析柱，流程最短、更先流出；小于分级下限的小分子可自由进入微球内部孔道（内水体积，Vᵢ），流程最长、最后流出；介于二者之间的分子则按尺寸不同程度地进入孔道而获得分离。整个过程为物理分离，介质与样品之间无离子、疏水等结合作用，缓冲体系可自由选择，分离条件温和，有利于保持生物大分子的天然构象与活性。

10% 高浓度琼脂糖形成致密、窄分布的小孔网络，筛分选择性集中于小蛋白与多肽区间，其分级范围与国际经典高交联小孔琼脂糖介质（Superose 12，球蛋白 1 kDa ～ 300 kDa）相对应；同时较高的基质浓度赋予微球更好的机械刚性、耐压性与流速适应性，柱床稳定、装柱重复性好。

本产品适用于多肽激素、小蛋白、细胞色素类小分子蛋白、抗体片段、寡核苷酸与低聚糖的分离纯化、聚体去除及小分子脱盐，也可作为小分子配基高密度固定化的基础骨架，满足实验室研发、中试与规模化生产需求。

二、   产品特点

2.1  小孔高分辨，专攻小蛋白与多肽

10% 琼脂糖提供 1 kDa ～ 300 kDa（球蛋白）的分级范围，对胰岛素、多肽激素、细胞色素 C、生长因子、小分子酶等具有优异的尺寸筛分能力，可实现分子量差异约 1.5 ～ 2 倍样品的高分辨率分离。

2.2  寡核苷酸/低聚糖适配性好

小孔网络与亲水孔道适合寡核苷酸、核酸适配体、siRNA 片段及低聚寡糖按链长/分子量分级，有效去除单核苷酸、盐、保护基与小分子杂质。

2.3  刚性好、流速快、柱床稳定

高浓度基质机械强度高，更大工作压力达 0.06 MPa、推荐流速 10 ～ 25 cm/h，理论塔板数≥4000/m，装柱与重复上样过程中柱床不易压缩、沟流，重复性与放大性能好。

2.4  非特异性吸附低、回收率高

中性亲水的高纯度琼脂糖基质对多肽、小蛋白与寡核苷酸吸附极低，目标样品回收率≥95%，并可减少小肽在介质上的疏水/离子性二次作用导致的拖尾。

2.5  耐碱耐清洗，重复使用次数多

可耐受短期 1 M NaOH 在位清洗及 8 M 尿素、6 M 盐酸胍等变性剂，便于彻底去除多肽/核酸污染与内毒素，延长介质使用寿命，降低生产成本。

2.6  羟基密集，利于小分子配基高密度偶联

单位体积羟基含量高，可经 CNBr、环氧、NHS 等活化高密度偶联小分子配基、染料、金属离子或短肽，制备高载量亲和、离子交换或疏水介质。

三、   技术参数

表1  琼脂糖微球 10B技术参数

 四、   储存条件与稳定性

4.1  储存条件

产品出厂时介质以约 50% 悬液浓度保存于 20%（v/v）乙醇水溶液中，应于 2 ～ 8 ℃ 避光、密封保存，严禁冷冻（结冰会破坏琼脂糖珠体结构，导致柱床产生空隙、柱效不可逆下降），并始终保持介质浸没于液面以下，严禁干涸。运输与储存中应避免剧烈震动、倒置与高温暴晒。密封保存条件下，产品自生产之日起保质期为 24 个月；开封后在无菌操作、规范储存条件下可使用 12 个月。

4.2  pH 稳定性

本产品长期连续工作的推荐 pH 范围为 4 ～ 9；短时清洗/再生可耐受 pH 2 ～ 14.0，可使用规定浓度的 NaOH 进行在位清洗与微生物控制，清洗后应立即用纯水或平衡缓冲液冲洗至中性，避免长期高温强碱接触。

4.3  化学稳定性

介质在常用水相缓冲液中稳定，耐受 8 M 尿素、6 M 盐酸胍、30% 乙醇、20% 异丙醇、1 M 乙酸、1 M NaOH（短期）及常规生化缓冲液、中性有机溶剂。

应避免与下列物质/条件接触：强氧化剂（高氯酸盐、过硫酸盐等）、强极性有机溶剂（丙酮、乙腈浓度＞50%）、121 ℃ 高温高压灭菌。

4.4  再生与重复使用

每次分离后，先用 2 ～ 3 倍柱床体积高盐缓冲液（如 2 M NaCl + 20 mM PB，pH 7.4）冲洗去除非特异性吸附杂质，再用 3 ～ 5 倍柱床体积平衡缓冲液重新平衡即可重复使用；污染较重、柱压升高或分辨率下降时按 6.5 进行在位清洗。规范再生与清洗条件下，介质可重复使用多次而分离性能无明显下降；建议在同一项目、同一类样品范围内重复使用，不同样品间不建议交叉使用。