一、使用仪器:
小易蛋白纯化仪是一款高效、精准的层析系统,专用于蛋白质及抗体的纯化、连续上样。该仪器配备高灵敏度液位检测模块,可在上样完成后自动终止运行,有效避免预装层析柱排空,实现全自动无人值守操作,显著提升实验效率并降低人工干预需求。其紧凑型设计支持在低温环境下运行,可置于冰箱或冷房内,满足温度敏感型生物分子(如酶、抗体、膜蛋白等)的纯化要求。该仪器兼容多种层析技术,包括但不限于:
•脱盐柱(Desalting Columns)
•分子筛层析(Size-Exclusion Chromatography, SEC)
•镍柱亲和纯化(Ni-NTA Affinity Chromatography)
•抗体亲和纯化(如Protein A/G/L亲和层析)
小易蛋白纯化仪可灵活应用于实验室小规模纯化及特定场景下的层析,为研究人员提供稳定、可靠的蛋白质分离解决方案。
三大功能:
1、适配各种纯化柱
2、自动化上样排气
3、可4℃低温纯化
二、镍预装重力柱
1ml预装HP Ni-TED预装重力柱:该预装柱预装有HP Ni TED Agarose Beads 6FF,这是一种由6%高交联琼脂糖微球为基质的镍离子螯合介质,通过五齿配体TED(三羧乙基二乙烯三胺)共价偶联Ni²⁺,实现对组氨酸标签蛋白的高效、高 特异性捕获。核心优势:极低Ni²⁺泄漏;动态载量≥20 mg His标签蛋白/mL树脂;耐受高流速及多种化学添加剂。预装柱柱体由生物相容性聚丙烯制成,不会与生物分子发生相互作用。滤膜孔径经过优化,可直接在柱上加载超声波处理的未澄清裂解液,而不会造成背压问题或介质泄漏。
表11.HP Ni TED Agarose Beads 6FF 的特点
球型基质 | 6% 高交联度琼脂糖 |
平均粒径 | 90 µm (45-165 µm) |
动态载量(DBC) | ≥20 mg His标签蛋白/mL沉降树脂 |
存储方案 | 20%乙醇 |
存储温度 | 2-8 °C储存。 |
三、应用案例:
样品:N-His,蛋白大小为18kDa
表达宿主:大肠杆菌
柱子: 1ml预装HP-Ni-TED预装重力柱
流速:0.3ml/min
上样缓冲液:20mM PB, 500mM NaCl, 5mM EDTA , 10mM咪唑, PH=8.0
洗杂缓冲液1:20mM PB, 500mM NaCl, 5mM EDTA , 50mM咪唑, PH=8.0;速度:1.4 ml/min
洗杂缓冲液2:20mM PB, 500mM NaCl, 5mM EDTA , 100mM咪唑, PH=8.0; 速度:1.4 ml/min
洗脱缓冲液1:20mM PB, 500mM NaCl, 5mM EDTA , 250mM咪唑, PH=8.0;速度:0.5ml/min
洗脱缓冲液2:20mM PB, 500mM NaCl, 5mM EDTA , 350mM咪唑, PH=8.0;速度:0.5ml/min
洗涤缓冲液:20mM PB, 500mM NaCl, 5mM EDTA , 500mM咪唑, PH=8.0;速度:0.5ml/min
蛋白表达鉴定结果SDS-PAGE:
泳道1,样品;泳道2,流穿;泳道3:洗脱缓冲液1:250mM 咪唑;泳道4,洗脱缓冲液2:350mM 咪唑;泳道5,纯化后填料;注,洗杂和洗涤缓冲液均没有洗出蛋白峰