琼脂糖微球 2B (外泌体病、毒颗粒纯化)

一、   产品概述

琼脂糖微球 2B 是一款以高纯度琼脂糖为原料，通过反向悬浮乳化—可控交联技术制备的 2% 浓度琼脂糖球状层析介质，是本系列中琼脂糖浓度更低、孔径更大、排阻极限更高的凝胶过滤（尺寸排阻，SEC）介质，同时也是超大分子靶向亲和层析介质的理想基础骨架。

凝胶过滤层析（尺寸排阻层析，Gel Filtration / Size Exclusion Chromatography）依据分子的流体力学体积（尺寸）差异进行分离：大于凝胶排阻极限的分子不能进入微球内部孔道，只能沿微球之间的空隙（外水体积，V₀）流经层析柱，流程最短、更先流出；小于分级下限的小分子可自由进入微球内部孔道（内水体积，Vᵢ），流程最长、最后流出；介于二者之间的分子则按尺寸不同程度地进入孔道而获得分离。整个过程为物理分离，介质与样品之间无离子、疏水等结合作用，缓冲体系可自由选择，分离条件温和，有利于保持生物大分子的天然构象与活性。

2% 低浓度琼脂糖形成均一、贯通的超大孔三维网络，球蛋白排阻极限高达 40,000,000 Da（40 MDa），可高效处理传统 4B、6B 等中孔径介质无法容纳的超大分子量样品，广泛适用于细胞外囊泡（外泌体）、病毒颗粒与病毒载体、病毒样颗粒（VLP）、大型质粒与核酸、超大蛋白复合物及高分子量多糖的分离纯化。

本产品完整保留了琼脂糖基质优异的亲水性、极低的非特异性吸附与生物相容性，可在温和生理条件下更大程度维持囊泡、病毒、核酸等活性样品的天然结构与功能。全流程在 GMP 级生产线封闭制备，批次稳定、溯源完整，性能可等效替代进口同类产品（Sepharose 2B / CL-2B），适用于实验室科研、中试放大及规模化生产。

二、   产品特点

2.1  系列更大孔径，排阻极限高达 40 MDa

2% 琼脂糖构筑超大孔道结构，球蛋白排阻极限达 40,000,000 Da、葡聚糖分级上限达 20,000,000 Da，是本系列中可分离分子尺寸更大的型号，专门解决病毒、囊泡、大质粒等超大样品在常规介质中无法进入孔道、直接随空体积流穿的问题。

2.2  极低非特异性吸附，超大分子回收率高

采用高纯度琼脂糖原料，基质不含带电修饰基团、亲水性极强，对囊泡、病毒、核酸、多糖及蛋白的非特异性吸附极低，目标样品回收率≥95%，且无明显变性失活风险，尤其利于保护膜结构囊泡与包膜病毒的完整性与感染活性。

2.3  温和条件分离，生物相容性优异

琼脂糖为天然多糖基质，无毒、无免疫原性，可在近生理 pH 与离子强度下完成全流程分离，避免极端条件对病毒、外泌体、质粒等活性样品的损伤，是细胞外囊泡与基因治疗载体下游纯化的经典 SEC 介质。

2.4  超大孔传质顺畅，大分子分辨率良好

贯通的超大孔网络显著降低了超大分子的传质阻力，使囊泡、病毒颗粒可自由进出孔道，依据流体力学尺寸实现颗粒与游离蛋白、脂蛋白、核酸片段、小分子杂质的基线分离，对尺寸差异≥3 倍的超大分子具有良好分级能力。

2.5  羟基丰富，是超大分子亲和介质的优质骨架

微球表面富含活性羟基，可经 CNBr、环氧、NHS 等方法活化，偶联肝素、抗体、凝集素等配基制备超大分子靶向亲和介质；超大孔道可显著提升病毒、囊泡等大尺寸靶标的可接近性与结合载量。

2.6  批次稳定、合规可溯

全流程遵循 GMP 规范生产，每批次经全项性能检测，批次间关键参数偏差≤5%，提供完整批生产记录、溯源记录与检验报告（COA），可满足生物制药研发与申报的合规要求。

三、   技术参数

表1  琼脂糖微球 2B技术参数

四、   储存条件与稳定性

4.1  储存条件

产品出厂时介质以约 50% 悬液浓度保存于 20%（v/v）乙醇水溶液中，应于 2 ～ 8 ℃ 避光、密封保存，严禁冷冻（结冰会破坏琼脂糖珠体结构，导致柱床产生空隙、柱效不可逆下降），并始终保持介质浸没于液面以下，严禁干涸。运输与储存中应避免剧烈震动、倒置与高温暴晒。密封保存条件下，产品自生产之日起保质期为 24 个月；开封后在无菌操作、规范储存条件下可使用 12 个月。

4.2  pH 稳定性

本产品为 2% 低浓度轻度交联琼脂糖基质，长期连续工作的推荐 pH 范围为 4 ～ 9；短时清洗/再生可耐受 pH 2 ～ 12，但应避免高浓度强碱长时间接触（在位清洗建议 0.1 ～ 0.5 M NaOH、接触 15 ～ 30 min，随后立即冲至中性），亦应避免长时间强酸条件。

4.3  化学稳定性

介质在常用水相缓冲液中稳定，耐受 8 M 尿素、6 M 盐酸胍、30% 乙醇、20% 异丙醇、1 M 乙酸及常规生化缓冲液、中性有机溶剂。

应避免与下列物质/条件接触：强氧化剂（高氯酸盐、过硫酸盐等）、高浓度强碱（＞0.5 M NaOH 长期接触）、强极性有机溶剂（丙酮、乙腈浓度＞50%）、121 ℃ 高温高压灭菌。

4.4  再生与重复使用

每次分离后，先用 2 ～ 3 倍柱床体积高盐缓冲液（如 1.5 M NaCl + 20 mM PB，pH 7.4）冲洗去除非特异性吸附杂质，再用 3 ～ 5 倍柱床体积平衡缓冲液重新平衡即可重复使用；污染较重、柱压升高或分辨率下降时按 6.5 进行在位清洗。规范再生与清洗条件下，介质可重复使用多次而分离性能无明显下降；建议在同一项目、同一类样品范围内重复使用，不同样品间不建议交叉使用。