镍-NTA琼脂糖磁珠（Ni-NTA Agarose MagBeads）

一、  产品概述

Ni-NTA Agarose MagBeads（镍-NTA琼脂糖磁珠）是基于超顺磁性琼脂糖微球为载体，表面共价偶联NTA（次氮基三乙酸）螯合基团并负载镍离子的金属螯合亲和磁珠（IMAC）。本产品采用高纯度交联琼脂糖基质，搭配稳定的四齿螯合NTA结构，可特异性结合带有6×His、8×His标签的重组蛋  白。

产品兼容天然活性纯化（非变性）与变性纯化（含尿素/盐酸胍）两种实验体系，具备镍离子脱落率低、载量高、非特异性吸附低、磁分离速度快等优势，广泛适用于科研级重组蛋白快速纯化、高通量样本筛选、Pull-down互作实验等场景。

二、  产品优势

Ø  高结合载量：优化NTA螯合工艺，蛋白结合容量高，单次纯化可获得高产量目的蛋白

 Ø  螯合稳定性强：四齿配位结构牢牢固定镍离子，耐受常规洗涤、低浓度还原剂，镍脱落极低，减少蛋白污染

Ø  双体系兼容：同时适配非变性温和条件与高浓度尿素/盐酸胍变性体系，适用范围广

Ø  极低非特异吸附：亲水性琼脂糖基质，有效减少杂蛋白非特异性结合，纯化产物纯度高

Ø  超顺磁特性：无剩磁、不团聚，磁响应速度快，30s内完成快速磁分离，操作便捷

Ø  可重复再生：支持多次脱镍、重镍活化再生，大幅降低实验成本

Ø  适配高通量：兼容离心管手动纯化、磁力板高通量筛选、自动化磁珠纯化设备

三、  技术参数

四、  主要应用领域

•       6×His/8×His标签重组蛋白纯化（原核、真核表达体系）

•       天然态活性蛋白纯化、变性态包涵体蛋白纯化

•       蛋白Pull-down实验、蛋白互作验证

•       高通量蛋白样本筛选与富集

          •        酶蛋白、功能重组蛋白批量制备

五、  标准操作流程

        通用缓冲液参考（可按需配制）

          •        结合缓冲液：20 mM Tris、500 mM NaCl、10–20 mM 咪唑，pH 7.4–8.0

          •        洗涤缓冲液：20 mM Tris、500 mM NaCl、40–60 mM 咪唑，pH 7.4–8.0

          •        洗脱缓冲液：20 mM Tris、500 mM NaCl、250–500 mM 咪唑，pH 7.4–8.0

          •        变性体系缓冲液：添加8M尿素或6M盐酸胍，适配对应结合、洗涤、洗脱配方

5.1 磁珠预处理

          1、产品2–8℃取出，室温平衡10–15 min，充分颠倒混匀，使磁珠完全分散；

          2、吸取所需体积磁珠悬液至离心管，置于磁力架静置30 s，完全吸附后彻底弃除上清；

          3、加入等体积结合缓冲液轻柔重悬洗涤，磁力分离弃上清，重复洗涤2次，完成平衡。

5.2 样品结合

          1、将预处理后的蛋白样品（裂解上清/变性溶解液）与平衡好的磁珠充分混合；

          2、室温翻转孵育30–60 min（低丰度蛋白可4℃孵育1–2 h），保证充分结合；

          3、磁力分离30 s，收集流出液，可用于检测结合效率。

5.3 杂蛋白洗涤

          1、加入适量洗涤缓冲液轻柔吹打重悬磁珠，室温静置5 min；

          2、磁力分离弃上清，重复洗涤3–5次，彻底去除非特异性结合杂蛋白；

          3、最后一次洗涤尽量吸干残留上清，避免稀释洗脱液。

5.4 目的蛋白洗脱

         1、加入适量洗脱缓冲液，轻柔重悬磁珠，室温孵育5–10 min；

         2、磁力分离后小心收集上清，即为纯化His标签蛋白；

         3、为提升回收率，可重复洗脱1次，合并两次洗脱液。

5.5 磁珠再生与保存（可重复使用）

         1、洗脱后的磁珠用超纯水洗涤2次，去除残留咪唑；

         2、使用50 mM EDTA溶液孵育10 min，彻底脱除残留镍离子，洗涤干净；

         3、0.1 M NiSO₄溶液重悬孵育20 min，重新螯合镍离子；

         4、纯水洗涤多余镍离子，最后用20%乙醇重悬，2–8℃保存备用。

六、  注意事项

        •        严禁冷冻磁珠，冷冻会破坏琼脂糖微球结构，导致磁珠失效、载量下降；

        •        全程避免剧烈震荡、高强度吹打，防止磁珠破碎，增加非特异性吸附；

        •        样本中避免高浓度EDTA、EGTA等螯合剂，会竞争脱去磁珠镍离子，降低结合效率；

        •        还原剂浓度不可过高，高浓度DTT会导致镍离子脱落，建议控制在5 mM以内；

        •        咪唑浓度需梯度优化，洗涤咪唑过低杂蛋白多，过高会造成目的蛋白提前洗脱；

        •        本产品仅用于科研实验，禁止用于临床诊断、治疗及食品、药品生产领域。

七、  储存条件与有效期

        •        储存条件：2–8℃避光密封保存，严禁冷冻、严禁室温长期放置；

        •        未开封有效期：12个月；

        •        开封后有效期：6个月（规范储存、无污染前提下）；

        •        再生磁珠：反复再生建议不超过5次，保证纯化性能稳定。

八、  常见问题与解决方案

九、  公司信息 & 技术支持

       公司名称：江苏千株松生物科技有限公司

       公司地址：镇江市句容市宝华镇仙林东路9号双创大厦12楼1217室

       技术支持：17302508337（微信同号）

       公司网址：www.qianzhusong.com

       温馨提示：实验过程中遇到任何技术问题，可随时联系技术支持，我们将提供一对一实验方案优化与技术指导。