一、产品描述
预装柱特点
预装柱柱体由生物相容性聚丙烯制成,不会与生物分子发生相互作用。滤膜孔径经过优化,可直接在柱上加载超声波处理的未澄清裂解液,而不会造成背压问题或介质泄漏。
柱体配有入口的密封件和出口的快拆端。表1列出了预装柱的特性。
注意:预装柱不能打开或重新填充;确保适配器紧固以防止泄漏。
表 1 预装柱的特点。
柱子体积 | 1 mL,5 mL,20mL |
柱子尺寸 | 7.8 × 25 mm (1 ml); 15.8× 27 mm (5 ml) ; 15.8 × 100 mm (20 ml) |
更大流速 | 1 mL: 4 mL/min, 5 mL: 20 mL/min, 20 mL: 4 mL/min, |
推荐流速 | 1 mL: 1 mL/min, 5 mL: 5 mL/min, 20 mL: 1 mL/min, |
更大背压 | 3 bar (0.3 MPa) |
填料特性
该预装柱预装有Ni NTA Agarose Beads 6FF,这是一种由 90 微米高度交联的琼脂糖珠粒组成,并带有固定的螯合基团
几种氨基酸,例如组氨酸,会与许多金属离子形成复合物。如果蛋白质表面有合适的复合物形成氨基酸残基暴露,Ni NTA Agarose Beads 6FF 会选择性地结合蛋白质。例如,添加额外的组氨酸(如组氨酸标签)会增加对镍离子的亲和力,通常会使带有组氨酸标签的蛋白质成为例如大肠杆菌提取物中其他蛋白质的最强结合物。
表2 Ni NTA Agarose Beads 6FF的特点
基质 | 高交联球形琼脂糖,6% |
平均粒径1 | 90 μm (d50v) |
流速 | 在温度为20°C、柱高1米、柱床高度20厘米的条件下,使用与水在3 bar(0.3 MPa)以下时粘度相同的缓冲液,流速可达700厘米/小时。 |
动态结合载量2 | 大约50 mg His6标记蛋白/ mL填料 |
pH工作范围 | 2 – 12 |
pH 稳定性3 | 短期:2 – 14 长期:2 – 12 |
工作温度 | 4°C – 30°C |
化学稳定性 | 所有常用的水缓冲液,1 M醋酸,1 M NaOH4, 8 M尿素,6 M盐酸胍,30%异丙醇,70%乙醇 |
储存溶液 | 20%乙醇 |
1 d50v是累积体积分布中的中等颗粒大小。
2 在Tricorn™ 5/100柱中,以1分钟的停留时间、600 cm/h的流速,在50 mM Tris-HCl缓冲液(pH 8.0)中测量的10%穿透时的动态结合能力。
3 短期pH:可以在不影响功能的情况下进行清洁或消毒的pH范围。长期pH:可以在不影响功能的情况下操作的pH范围。
带Ni2+电荷的填料与所有常用的水性缓冲液、还原剂、变性剂(如6M Gua-HCl和8M尿素)以及一系列其他添加剂兼容(见表3)。
表3 Ni NTA Agarose Beads 6FF至少在给定浓度下与下列化合物相容
还原剂 | 5 mM DTE 5 mM DTT 20 mM ß-mercaptoethanol 5 mM TCEP 10 mM reduced glutathione |
变性剂 | 8 M urea 6 M guanidine hydrochloride |
去污剂 | 2 % Triton X-100 (nonionic) 2 % Tween 20 (nonionic) 2% NP-40 (nonionic) 2 % cholate (anionic) 1 % CHAPS (zwitterionic) |
其它添加剂 | 500 mM imidazole 20 % ethanol 50 % glycerol 100 mM Na2SO4 1.5 M NaCl 1 mM EDTA 60 mM citrate |
缓冲试剂 | 50 mM sodium phosphate, pH 7.4 100 mM Tris-HCl, pH 7.4 100 mM Tris-acetate, pH 7.4 100 mM HEPES, pH 7.4 100 mM MOPS, pH 7.4 100 mM sodium acetate, pH 4 |