预活化树脂

Carboxyl Agarose MagBeads(羧基琼脂糖磁珠)

产品货号:QS07004

规格规格:4mL,20mL,40mL

储存条件:4-8℃

产品优势:高强度,高载量

应用场景:羧基活化树脂

产品手册:

一、  产品概述

Carboxyl Agarose MagBeads(羧基琼脂糖磁珠)是以 4% 高交联亲水性琼脂糖为基质,通过共价键合技术在微球表面均匀修饰高密度羧基(-COOH)功能基团的超顺磁性微球。产品保留了琼脂糖基质优异的生物相容性、多孔网络结构和低非特异性吸附特性,同时集成了超顺磁性纳米颗粒的快速磁分离能力,无需离心即可实现固液快速分离。

本产品可通过 EDC/NHS 等碳二亚胺类交联剂介导,高效偶联含有游离氨基(-NH₂)的蛋白质、抗体、多肽、酶、核酸适配体、多糖及小分子化合物等生物配体。偶联反应条件温和,对生物分子活性影响小,广泛应用于抗体纯化、抗原检测、免疫沉淀、蛋白互作研究、生物标志物富集、药物筛选及自动化高通量样品处理等领域。

二、  产品特性与优势

·       高活性羧基载量:表面修饰高密度活性羧基基团,配体偶联容量高,可实现生物分子的高效固定,满足高载量纯化与富集需求。

·       优异生物相容性:采用高纯度琼脂糖基质,亲水性,非特异性吸附极低,更大程度保留生物分子的天然构象与生物活性。

·       快速磁分离性能:磁含量均匀稳定,超顺磁性强,在常规磁力架作用下 30-60 秒即可完全沉降,操作简便,大幅缩短实验时间。

·       化学稳定性优异:交联结构强度高,耐酸碱、耐常规有机溶剂和去污剂,可反复清洗和再生,磁珠无破碎、无磁性颗粒脱落。

·       批次一致性好:严格的生产工艺控制,确保不同批次产品的粒径、磁含量、功能基团载量等关键指标高度一致,实验重复性好。

·       广泛的适配性:兼容手动离心管操作、96/384 孔板高通量筛选及各类自动化磁珠纯化设备,适用于科研实验与规模化生物制备。

三、  核心技术参数

检测项目

技术指标

基质材质

4% 高交联磁性琼脂糖

功能基团

羧基(-COOH)

粒径范围

50-150 μm

磁珠浓度

25% (v/v) 悬浮液

羧基离子结合容量

80~120 μmol/mL 磁珠

磁分离时间

30-60 s(常规磁力架)

保存溶剂

20% 乙醇无菌水溶液

pH 耐受范围

2.0 - 12.0

耐受温度

2 - 40℃(禁止冷冻)

四、  标准操作流程

本流程适用于羧基磁珠偶联氨基类生物分子(蛋白、抗体、多肽)的常规实验操作,核心分为磁珠预处理、羧基活化、配体偶联、封闭、清洗保存五大步骤。

1. 磁珠预处理

充分颠倒、吹打混匀磁珠储存液,确保磁珠完全均匀悬浮;根据实验需求吸取适量磁珠悬浮液至无菌离心管中,将离心管置于磁力架上静置 30 秒,待磁珠完全沉降后,小心吸弃上层保存液;取下离心管,加入等量活化缓冲液(推荐 0.1 M MES,pH 4.5-5.5)轻柔吹打重悬磁珠,再次磁力分离弃上清,重复清洗 2 次,完成磁珠预处理。

2. 羧基基团活化

向预处理后的磁珠中加入适量活化缓冲液重悬;新鲜配制 EDC 和 NHS 溶液(推荐终浓度分别为 100-200 mM 和 20-40 mM),迅速加入磁珠悬浮液中;室温条件下低速翻转振荡反应 15-30 分钟,活化磁珠表面的羧基基团。

重要提示:EDC 和 NHS 水溶液不稳定,必须现配现用;活化时间不宜过长,否则会导致活化酯水解,降低偶联效率。

3. 配体偶联反应

活化反应结束后,磁力分离弃去活化上清;将待偶联的氨基化配体溶解于偶联缓冲液(推荐 0.1 M MES,pH 5.0-6.0 或 PBS,pH 7.2-7.4)中,配制适宜浓度的配体溶液;向活化后的磁珠中加入配体溶液,充分吹打混匀;室温条件下低速翻转振荡反应 2-4 小时,或 4℃恒温振荡过夜。

4. 封闭未反应位点

偶联反应结束后,磁力分离弃去反应上清;加入封闭液(推荐 50 mM Tris-HCl,pH 7.4 或 1% BSA 溶液),室温封闭 30-60 分钟,彻底封闭磁珠表面未反应的活性羧基位点,杜绝后续实验非特异性结合干扰。

5. 清洗与平衡

封闭完成后,磁力分离弃封闭液;分别用 PBS 缓冲液(含 0.05% Tween-20)、超纯水交替清洗磁珠 3-5 次,去除残留交联剂、未结合配体与封闭液;最后将偶联后的功能化磁珠重悬于适配的储存缓冲液(如含20%乙醇的 PBS)中,4℃保存备用。

五、  应用场景

·       抗体与蛋白纯化:偶联特异性抗原或抗体,用于目标蛋白、单克隆抗体、多克隆抗体的快速纯化与富集。

·       免疫沉淀与互作研究:适配 Co-IP、Pull-down、RIP 等分子互作实验,高效捕获蛋白 - 蛋白、蛋白 - 核酸复合物。

·       生物标志物检测:偶联抗体或抗原,用于血清、血浆、细胞裂解液等复杂生物样本中低丰度生物标志物的富集与检测。

·       酶固定化:固定各类酶分子,制备固定化酶反应器,用于生物催化、药物合成等领域。

·       小分子药物筛选:偶联小分子药物或靶点蛋白,用于高通量药物筛选与结合亲和力测定。

·       核酸分离纯化:偶联核酸适配体或特异性探针,用于特定核酸序列的分离与富集。

六、  储存与运输条件

1. 运输条件

全程低温冷链运输(4℃冷藏),禁止冷冻、暴晒与高温运输,避免磁珠结构破坏、功能失效。

2. 储存条件

长期储存于 2-8℃无菌冰箱,严禁冷冻(冻结会导致琼脂糖微球破裂、磁珠团聚失效);储存时保持试剂管竖立放置,确保磁珠完全浸没于 20% 乙醇保护液中,避免干涸;开封后密封避光保存,防止微生物污染。

3. 保质期

未开封、规范储存条件下,产品保质期为 24 个月。

七、  注意事项

·       每次取样前必须充分颠倒、吹打混匀磁珠悬浮液,保证磁珠浓度均一,避免实验误差;禁止剧烈震荡、高速离心,防止微球破碎。

·       EDC 和 NHS 对水分敏感,需密封干燥保存,配制溶液时应使用无氨基的超纯水,且现配现用。

·       偶联反应的更佳 pH 为 4.5-6.0,pH 过高或过低都会显著降低偶联效率;避免使用含有氨基的缓冲液(如 Tris、甘氨酸)进行偶联反应。

·       磁力分离时请勿触碰管壁磁珠,吸弃上清时避免吸走磁珠,造成样品损耗。

·       产品无菌无酶,但实验操作仍需遵循无菌规范,防止微生物污染影响实验结果。

·       避免使用高浓度强变性剂(如 8 M 尿素、6 M 盐酸胍)长时间处理磁珠,以免破坏琼脂糖基质结构。

·       不同批次产品性能一致,可无缝衔接实验,无需重复摸索实验条件。

八、  常见问题与解决方案

常见问题

原因分析

解决方案

配体偶联效率低

EDC/NHS 失效、活化时间不当、偶联   pH 不适宜、缓冲液含氨基杂质

更换新鲜 EDC/NHS,控制活化时间在 15-30 分钟,调整 pH 至 4.5-6.0,使用无氨基缓冲液体系

磁珠出现团聚

操作温度异常、缓冲液盐浓度过高、剧烈震荡、活化后未及时偶联

全程室温或低温操作,优化缓冲液盐浓度,轻柔吹打混匀,活化后立即加入配体进行偶联

非特异性吸附偏高

未充分封闭、清洗不彻底、配体过量

延长封闭时间,增加清洗次数(可加入 0.05% Tween-20),优化配体用量

偶联后配体易脱落

偶联反应不充分、封闭不完全、储存条件不当

延长偶联反应时间,确保封闭彻底,4℃密封保存,避免反复冻融

磁分离速度慢

磁珠未充分重悬、磁力架磁力不足、磁珠浓度过低

充分混匀磁珠,更换适配强力磁力架,适当增加磁珠用量

九、  售后服务说明

本产品经过严格的质量检测,批次性能稳定、质量可控。若产品存在质量问题、性能不达标,可凭订单信息与产品批次号申请售后退换货;我司提供全程专业技术支持,可协助客户优化偶联、纯化实验方案,解决各类实验问题。

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官网地址:www.qianzhusong.com


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