葡聚糖凝胶 G25 层析预装柱(1mL，5mL，20mL，40mL和100mL）

一、   产品概述

葡聚糖凝胶G25层析预装柱（Dextran Gel G25 Prepacked Chromatography Columns，货号QS01082B）是以交联葡聚糖凝胶G-25（Dextran Gel G-25）为分离介质、在标准化柱管中预装而成的凝胶过滤层析（尺寸排阻层析，Gel Filtration / Size Exclusion Chromatography）即用型产品，主要用于蛋白质等生物大分子的脱盐、缓冲液置换及小分子杂质去除。

葡聚糖凝胶是由葡聚糖（右旋糖酐）与表氯醇交联形成的三维网状多孔微球。凝胶过滤分离依据分子的流体力学体积（尺寸）差异进行：大于凝胶排阻极限的分子不能进入微球内部孔道，只能沿微球之间的空隙（外水体积，V₀）流经层析柱，流程最短、更先流出；小于分级下限的小分子可自由进入微球内部孔道（内水体积，Vᵢ），流程最长、最后流出；介于二者之间的分子则按尺寸不同程度地进入孔道而得到分离。

G-25型凝胶孔径较小，对球状蛋白的分级范围为相对分子质量1,000～5,000，排阻极限约为5,000：相对分子质量大于约5,000的蛋白质、酶、抗体、多肽及核酸等大分子被完全排阻而在出外水体积时集中流出，盐离子及相对分子质量小于约1,000的小分子进入凝胶孔道而滞后流出，从而实现大分子与小分子的快速“组分离”。该产品定位于脱盐和缓冲液置换，不适用于大分子之间的精细分级分离。

本系列预装柱柱床经标准化装填，柱效稳定、重现性好，拆封后经简单平衡即可使用，免去自装柱的繁琐与批次差异；提供1 mL、5 mL、20 mL、40 mL和100 mL五种柱床体积规格，可采用重力流、注射器、蠕动泵或AKTA等层析系统操作，覆盖分析小试、工艺开发到中等规模制备的脱盐与换液需求。

二、   产品特点

2.1  即拆即用，柱床稳定、重现性好

柱床在标准化条件下预装并经柱效与流速检验，柱床均匀、无沟流、无气泡，拆封后以缓冲液平衡即可上样，避免了手工装柱造成的柱效波动，批次间重现性好，便于工艺转移与放大。

2.2  脱盐快速高效，样品稀释小

一次过柱即可完成脱盐或缓冲液置换，标准条件下盐等小分子去除率不低于95%，目标大分子回收率不低于90%（典型值，以实际样品为准）；大分子在外水体积集中流出，样品体积仅被稀释约1.1～1.5倍，显著优于透析，且无需电驱动设备，单柱操作通常数分钟至数十分钟完成。

2.3  规格齐全，便于线性放大

提供1 mL、5 mL、20 mL、40 mL、100 mL五种柱床体积，柱管内径系列化，可按上样体积（柱床体积的15%～30%）等比例放大，工艺参数可直接线性转移，满足从筛选小试到中试制备的不同处理量。

2.4  操作方式灵活，设备兼容性好

柱端配备标准鲁尔（Luer）及1/16″层析接头，可直接连接注射器手动操作，也可连接蠕动泵或AKTA等低压层析系统；20 mL以上规格支持自然重力流操作，无需设备即可完成常规脱盐。

2.5  分离条件温和，保持生物活性

凝胶过滤为物理分离过程，介质与样品之间无离子、疏水等结合作用，不依赖结合与洗脱，缓冲体系可自由选择，可在中性、等渗及低温条件下操作，能很好地保持蛋白质、酶、抗体等生物大分子的天然构象与生物活性。

2.6  化学稳定性好，可清洗重复使用

交联葡聚糖基质在常用水相缓冲液、8 M尿素、6 M盐酸胍中稳定，可耐受0.2 M NaOH短时在位清洗与微生物控制；规范使用与再生条件下可重复使用多次，性能无明显下降。

三、   技术参数

表1  葡聚糖凝胶G25填料技术参数

表2  各规格预装柱尺寸与推荐操作参数

注：①上样体积以脱盐/缓冲液置换的组分离为目的，取柱床体积的15%～30%；上样体积越小，脱盐与分离效果越好，更大上样量对应约30%柱床体积。②推荐流速对应室温下水相缓冲液，实际流速受缓冲液黏度、温度及柱床状态影响，操作压力不得超过0.15 MPa。③以上参数为推荐起始条件，正式使用前请结合具体样品进行小试优化。

四、   储存条件与稳定性

4.1  储存条件

产品出厂时柱床保存于20%（v/v）乙醇水溶液中，应于2～8℃避光、直立密封保存，严禁冷冻（结冰会破坏凝胶珠体结构，导致柱床产生空隙、柱效不可逆下降），并应始终保持柱床浸没于液面以下，严禁柱床干涸。储存和运输过程中应避免剧烈震动与倒置。密封保存条件下，产品自生产之日起保质期为24个月。

4.2  pH稳定性

交联葡聚糖G-25在pH 2～13范围内稳定，可在常用中性缓冲液中长期使用，亦可短时接触0.2 M NaOH进行在位清洗。应避免长时间处于强酸、强碱条件，清洗后应立即用纯水或平衡缓冲液冲洗至中性。

4.3  化学稳定性

介质在所有常用水相缓冲液中稳定，并可耐受8 M尿素、6 M盐酸胍等变性剂，适用于变性条件下的样品换液；可耐受20%乙醇。高浓度的乙醇、丙酮等有机溶剂会使葡聚糖凝胶脱水收缩、改变柱床体积，除20%储存乙醇外应避免使用；强氧化剂（如高浓度次氯酸钠、过氧化氢）会氧化破坏基质，严禁接触。

4.4  再生与重复使用

脱盐操作通常不保留杂质，每次使用后以3～5倍柱床体积纯水冲洗、再以3～5倍柱床体积20%乙醇平衡即可保存重复使用。处理过含较多蛋白、脂类或易吸附组分的样品后，应按6.6进行在位清洗。本产品建议在同一项目、同一类样品范围内重复使用，不同样品间不建议交叉使用。

五、   应用领域

5.1  蛋白质、酶与抗体脱盐

用于重组蛋白、酶、单克隆与多克隆抗体、疫苗抗原等相对分子质量大于5,000的生物大分子的脱盐，快速去除硫酸铵、氯化钠及其他盐类，可替代透析和超滤，显著缩短处理时间、减少样品稀释与活性损失。

5.2  缓冲液置换（换液）

将目标大分子从一种缓冲体系直接转移至另一种缓冲体系，如置换为PBS、生理盐液、层析上样缓冲液、冻干或浓缩前缓冲液、酶反应/标记反应缓冲液等，是离子交换、亲和层析前后及冷冻干燥前的常用样品处理步骤。

5.3  标记与偶联反应后纯化

用于荧光素（如FITC）、生物素、辣根过氧化物酶（HRP）、同位素、未反应交联剂等标记/偶联反应后，去除游离小分子标记物和交联剂，获得标记大分子产物。

5.4  小分子工艺杂质去除

可去除样品中的游离核苷酸、氨基酸、单糖、小分子染料、苯酚、叠氮钠、还原剂（DTT、β-巯基乙醇）、EDTA及相对分子质量低于约1,000的去污剂等小分子杂质。

5.5  核酸样品纯化

可用于长度大于约10个碱基对（bp）的双链DNA、寡核苷酸及核酸样品的纯化，去除未掺入的dNTP、引物、盐及小分子标记物，也适用于连接、内切酶及标记反应后的核酸换液。

5.6  多肽与其他大分子回收

适用于相对分子质量大于约5,000的多肽、多糖复合物及其他生物大分子与盐、小分子试剂的分离回收；相对分子质量1,000～5,000之间的组分因处于分级范围内，建议先小试验证回收率。