一、 产品概述
葡聚糖凝胶G50层析预装柱(Dextran Gel G50 Prepacked Chromatography Columns,货号QS01083B)是以交联葡聚糖凝胶G-50(Dextran Gel G-50)为分离介质、在标准化柱管中预装而成的凝胶过滤层析(尺寸排阻层析,Gel Filtration / Size Exclusion Chromatography)即用型产品,主要用于蛋白质等生物大分子的脱盐、缓冲液置换、小分子杂质去除及蛋白质的分子量分级分离。
葡聚糖凝胶是由葡聚糖(右旋糖酐)与表氯醇交联形成的三维网状多孔微球。凝胶过滤分离依据分子的流体力学体积(尺寸)差异进行:大于凝胶排阻极限的分子不能进入微球内部孔道,只能沿微球之间的空隙(外水体积,V₀)流经层析柱,流程最短、更先流出;小于分级下限的小分子可自由进入微球内部孔道(内水体积,Vᵢ),流程最长、最后流出;介于二者之间的分子则按尺寸不同程度地进入孔道而得到分离。
G-50型凝胶孔径中等,对球状蛋白的分级范围为相对分子质量1,500~30,000,排阻极限约为30,000:相对分子质量大于约30,000的蛋白质、酶、抗体及核酸等大分子被完全排阻而在外水体积集中流出,盐离子及相对分子质量小于约1,500的小分子进入凝胶孔道滞后流出,相对分子质量介于1,500~30,000之间的多肽与小蛋白则可按尺寸不同获得初步分级。该产品以脱盐和缓冲液置换为主要用途,兼具多肽、小蛋白的组分离能力,不适用于性质接近的大分子之间的高分辨率精细分级。
本系列预装柱柱床经标准化装填,柱效稳定、重现性好,拆封后经简单平衡即可使用,免去自装柱的繁琐与批次差异;提供1 mL、5 mL、20 mL、40 mL和100 mL五种柱床体积规格,可采用重力流、注射器、蠕动泵或AKTA等层析系统操作,覆盖分析小试、工艺开发到中等规模制备的脱盐、换液与分级分离需求。
二、 产品特点
2.1 即拆即用,柱床稳定、重现性好
柱床在标准化条件下预装并经柱效与流速检验,柱床均匀、无沟流、无气泡,拆封后以缓冲液平衡即可上样,避免了手工装柱造成的柱效波动,批次间重现性好,便于工艺转移与放大。
2.2 脱盐快速高效,样品稀释小
一次过柱即可完成脱盐或缓冲液置换,标准条件下盐等小分子去除率不低于95%,目标大分子回收率不低于90%(典型值,以实际样品为准);大分子在外水体积集中流出,样品体积仅被稀释约1.1~1.5倍,显著优于透析,且无需电驱动设备,单柱操作通常数分钟至数十分钟完成。
2.3 分级窗口覆盖多肽与小蛋白
在高效脱盐的同时,G-50提供相对分子质量1,500~30,000的分级窗口,可对多肽、小分子蛋白、细胞因子等进行分子量组分离,也可用于大于20个碱基的核酸片段与引物、dNTP等小分子的分离,一柱多用。
2.4 规格齐全,便于线性放大
提供1 mL、5 mL、20 mL、40 mL、100 mL五种柱床体积,柱管内径系列化,脱盐/组分离可按柱床体积的15%~30%、精细分级可按1%~5%等比例放大,工艺参数可线性转移,满足从筛选小试到中试制备的不同处理量。
2.5 操作方式灵活,设备兼容性好
柱端配备标准鲁尔(Luer)及1/16″层析接头,可直接连接注射器手动操作,也可连接蠕动泵或AKTA等低压层析系统;20 mL以上规格支持自然重力流操作,无需设备即可完成常规脱盐与换液。
2.6 分离条件温和,保持生物活性
凝胶过滤为物理分离过程,介质与样品之间无离子、疏水等结合作用,不依赖结合与洗脱,缓冲体系可自由选择,可在中性、等渗及低温条件下操作,能很好地保持蛋白质、酶、抗体等生物大分子的天然构象与生物活性。
2.7 化学稳定性好,可清洗重复使用
交联葡聚糖基质在常用水相缓冲液、8 M尿素、6 M盐酸胍中稳定,工作pH范围为2~10,规范使用与再生条件下可重复使用多次,性能无明显下降;清洗应避免强碱长时间接触(详见第4、6章)。
三、 技术参数
表1 葡聚糖凝胶G50填料技术参数
参数项目 | 技术指标 |
产品名称 | 葡聚糖凝胶G50层析预装柱(Dextran Gel G50 Prepacked Column) |
分离介质 | 交联葡聚糖凝胶G-50(Cross-linked Dextran Gel G-50) |
分离模式 | 凝胶过滤(尺寸排阻)层析;脱盐、缓冲液置换及蛋白分子量分级 |
分级范围(球状蛋白) | 相对分子质量 1,500 ~ 30,000 |
排阻极限 | 约 30,000(球状蛋白);双链DNA约20个碱基对(bp) |
粒径范围 | 50 ~ 150 μm(干态,Medium级) |
工作pH范围 | 2 ~ 10 |
在位清洗(CIP) | 推荐非离子型去污剂 / 高盐 / 酶清洗;工作pH 2~10,避免强碱长时间接触 |
推荐工作温度 | 4 ~ 30℃ |
更大操作压力 | 0.15 MPa(约1.5 bar) |
柱管材质 | 医用级聚丙烯(PP)/ 聚碳酸酯(PC) |
柱端筛板 | 超高分子量聚乙烯(UHMWPE),孔径20 μm |
柱端接口 | 标准鲁尔(Luer)接头 / 1/16″(10-32锥面)接头 |
化学相容性 | 常用水相缓冲液;8 M尿素;6 M盐酸胍;20%乙醇(工作pH 2~10) |
不相容物质 | 强氧化剂;强碱(pH>10)长时间接触;高浓度有机溶剂(>20%乙醇或丙酮等可使凝胶收缩) |
典型脱盐性能 | 盐去除率≥95%,蛋白回收率≥90%(标准条件一次过柱,典型参考值) |
储存缓冲液 | 20%(v/v)乙醇水溶液 |
储存温度 | 2 ~ 8℃,避光、防冻、防干涸 |
保质期 | 密封保存条件下24个月 |
表2 各规格预装柱尺寸与推荐操作参数
柱床体积 | 柱床尺寸(内径×床高) | 推荐流速 | 推荐上样体积(更大) | 推荐洗脱收集体积 | 柱端接口 |
1 mL | 0.7 cm × 2.6 cm | 0.5 ~ 1 mL/min | 0.10 mL(≤0.15 mL) | 0.4 ~ 0.5 mL | 鲁尔 / 1/16″ |
5 mL | 1.6 cm × 2.5 cm | 1 ~ 4 mL/min | 0.5 ~ 1.0 mL(≤1.5 mL) | 1.5 ~ 2.0 mL | 鲁尔 / 1/16″ |
20 mL | 1.6 cm × 10.0 cm | 1 ~ 3 mL/min | 2 ~ 4 mL(≤6 mL) | 8 ~ 10 mL | 鲁尔 / 1/16″ |
40 mL | 1.6 cm × 20.0 cm | 2 ~ 6 mL/min | 4 ~ 8 mL(≤12 mL) | 16 ~ 20 mL | 1/16″ |
100 mL | 2.8 cm × 20.0 cm | 2 ~ 6 mL/min | 10 ~ 20 mL(≤30 mL) | 40 ~ 50 mL | 1/16″ |
注:①脱盐/缓冲液置换(组分离)时上样体积取柱床体积的15%~30%,上样体积越小脱盐效果越好,更大上样量对应约30%柱床体积。③推荐流速对应室温下水相缓冲液,实际流速受缓冲液黏度、温度及柱床状态影响;操作压力不得超过0.15 MPa。④以上参数为推荐起始条件,正式使用前请结合具体样品进行小试优化。
四、 储存条件与稳定性
4.1 储存条件
产品出厂时柱床保存于20%(v/v)乙醇水溶液中,应于2~8℃避光、直立密封保存,严禁冷冻(结冰会破坏凝胶珠体结构,导致柱床产生空隙、柱效不可逆下降),并应始终保持柱床浸没于液面以下,严禁柱床干涸。储存和运输过程中应避免剧烈震动与倒置。密封保存条件下,产品自生产之日起保质期为24个月。
4.2 pH稳定性
交联葡聚糖凝胶G-50在pH 2~10范围内稳定,可在常用中性缓冲液中长期使用。与G-25等小孔凝胶不同,本型号在强碱性条件下葡聚糖糖苷键会加速水解,应避免pH>10的强碱长时间接触,亦应避免长时间强酸条件;清洗后应立即用纯水或平衡缓冲液冲洗至中性。
4.3 化学稳定性
介质在所有常用水相缓冲液中稳定,并可耐受8 M尿素、6 M盐酸胍等变性剂,适用于变性条件下的样品换液;可耐受20%乙醇。高浓度的乙醇、丙酮等有机溶剂会使葡聚糖凝胶脱水收缩、改变柱床体积,除20%储存乙醇外应避免使用;强氧化剂(如高浓度次氯酸钠、过氧化氢)会氧化破坏基质,严禁接触;不得使用0.2 M NaOH等强碱长时间在位清洗。
4.4 再生与重复使用
脱盐操作通常不保留杂质,每次使用后以3~5倍柱床体积纯水冲洗、再以3~5倍柱床体积20%乙醇平衡即可保存重复使用。处理过含较多蛋白、脂类或易吸附组分的样品后,应按6.6进行在位清洗。本产品建议在同一项目、同一类样品范围内重复使用,不同样品间不建议交叉使用。


<
<
<

客服1