重组蛋白A/G琼脂糖磁珠rProtein A/G Agarose MagBeads（抗体纯化）

一、   产品概述

rProtein A/G Agarose MagBeads（重组蛋白A/G琼脂糖磁珠，货号QS07008）是江苏千株松生物科技有限公司自主研发的新一代抗体亲和纯化介质。本产品将基因工程重组表达的Protein A/G融合蛋白通过共价键高密度偶联于超顺磁性琼脂糖微球表面，兼具Protein A与Protein G双重抗体结合特性，能够高效、广谱地捕获多种物种和亚型的免疫球蛋白G（IgG）及含Fc段的融合蛋白。

产品采用磁性分离模式，无需离心或过滤操作，仅需借助磁力架即可在数秒内完成磁珠与液相的分离，大幅缩短实验流程并减少样品损失。琼脂糖基质具有良好的亲水性和低非特异性吸附特性，经优化的封闭工艺进一步降低了杂蛋白结合背景，适用于从血清、血浆、腹水、细胞培养上清等复杂样品中一步纯化抗体，也可广泛应用于免疫沉淀（IP/Co-IP）、染色质免疫沉淀（ChIP）、抗体固定化及Fc融合蛋白纯化等研究场景。

本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断或治疗。

二、   产品功能与特点

2.1  核心功能

·        抗体亲和纯化：从血清、血浆、腹水、细胞培养上清液等复杂样品中一步纯化IgG类抗体。

·        免疫沉淀（IP/Co-IP）：用于抗原-抗体复合物的富集与分离，研究蛋白质相互作用。

·        染色质免疫沉淀（ChIP）：适用于蛋白质-DNA相互作用研究中的抗体结合与复合物富集。

·        Fc融合蛋白纯化：捕获含免疫球蛋白Fc段的重组融合蛋白。

·        抗体固定化：将抗体固定于磁珠表面，用于ELISA、Western Blot等后续检测或亲和筛选。

2.2  技术优势

（1）广谱结合，覆盖全面

重组Protein A/G融合配体同时包含Protein A的5个免疫球蛋白结合结构域和Protein G的2个结合结构域，相比单一Protein A或Protein G具有更广的抗体结合谱，可高效结合人、小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、豚鼠、猪、牛、马、犬等多种物种的IgG，并对IgG2a、IgG2b、IgG1、IgG3等多种亚型均有良好的结合能力。

（2）重组配体，低背景

采用基因工程改造的重组Protein A/G，去除了天然蛋白中与白蛋白、非特异性Ig结合的区域，仅保留高亲和力的Fc结合域，从源头上降低了非特异性蛋白吸附，显著提高纯化抗体的纯度和免疫沉淀的信噪比。

（3）磁珠分离，操作便捷

超顺磁性琼脂糖微球在磁场中可快速聚集，移除磁场后立即均匀重悬，无磁记忆效应。整个分离过程无需离心、过滤或层析柱，仅需磁力架即可完成，操作简便、快速，适合高通量样品处理和小体积样品的高效回收。

（4）高结合容量，高回收率

配体高密度共价偶联，结合容量不低于10 mg兔IgG/mL沉降磁珠，在优化条件下可实现目标抗体的高效捕获与高回收率。

（5）稳定可靠，重复性好

琼脂糖基质化学稳定性好，可耐受常规洗脱条件（如0.1 M甘氨酸-盐酸，pH 2.5–3.0）和温和的再生条件；批间差控制严格，实验重复性好。

2.3  与传统方法对比

三、   技术参数

四、   应用领域

4.1  抗体纯化

从血清、血浆、腹水、细胞培养上清液、酵母或细菌表达上清等复杂生物样品中，通过亲和捕获一步纯化多克隆或单克隆IgG类抗体。纯化后的抗体可用于ELISA、Western Blot、免疫组化、流式细胞术、中和实验等下游应用。磁珠形式尤其适合小量样品（μg–mg级）的快速纯化和高通量筛选。

4.2  免疫沉淀（IP / Co-IP）

将特异性抗体与样品中的靶蛋白孵育形成抗原-抗体复合物后，加入rProtein A/G MagBeads捕获复合物，经磁性分离和洗涤去除未结合蛋白，最后洗脱获得富集的靶蛋白或蛋白复合物。适用于：

·        靶蛋白的富集与检测（Western Blot、质谱分析）。

·        蛋白质-蛋白质相互作用研究（Co-IP）。

·        翻译后修饰鉴定（磷酸化、泛素化、乙酰化等）。

·        蛋白复合物组成分析（联合质谱）。

4.3  染色质免疫沉淀（ChIP）

在ChIP实验中，rProtein A/G MagBeads用于捕获与靶蛋白结合的DNA-蛋白质-抗体复合物。磁珠操作可减少离心过程中的样品损失，提高ChIP效率和重复性，适用于组蛋白修饰、转录因子结合位点、染色质重塑因子等研究。产品低非特异性吸附的特点有助于降低ChIP背景，提高信噪比。

4.4  Fc融合蛋白纯化

许多重组蛋白药物和研究工具以IgG Fc段融合形式表达（如Fc-受体融合蛋白、Fc-细胞因子融合蛋白）。rProtein A/G MagBeads可通过Fc段亲和捕获此类融合蛋白，实现一步纯化，适用于小量表达筛选和纯化条件优化。

4.5  抗体固定化与亲和筛选

利用rProtein A/G MagBeads结合抗体Fc段的特性，可将抗体定向固定于磁珠表面（抗原结合位点朝外），用于：

·        亲和纯化特定抗原（反向免疫纯化）。

·        噬菌体展示、肽库筛选中的靶标固定。

·        ELISA、化学发光等检测体系中的固相抗体制备。

·        外泌体、囊泡等生物标志物的免疫捕获。

五、   操作指南

5.1  试剂与材料准备

使用前请准备以下试剂和材料：

·        rProtein A/G Agarose MagBeads（QS07008，25%悬浮液）

·        磁力架（适配相应离心管规格）

·        结合/洗涤缓冲液：1×PBS（pH 7.2–7.4），或TBS（20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，pH 7.5）

·        洗脱缓冲液：0.1 M甘氨酸-盐酸（Glycine-HCl），pH 2.5–3.0

·        中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 8.5–9.0（按洗脱液体积的1/10加入）

·        可选：0.1 M柠檬酸钠-盐酸（pH 3.0）用于温和洗脱；6 M盐酸胍用于再生

5.2  标准操作流程

步骤一：磁珠准备

·        将rProtein A/G MagBeads悬浮液充分涡旋振荡或颠倒混匀，确保磁珠完全重悬均匀。

·        根据实验需要吸取适量磁珠悬浮液（如50 μL 25%悬浮液 ≈ 12.5 μL沉降磁珠，可结合约125 μg兔IgG）至离心管中。

·        将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附于管壁（约10–30秒）后，小心移除上清。

·        加入等体积结合缓冲液，涡旋重悬磁珠，再次磁力分离并弃上清。重复洗涤1–2次。

步骤二：抗体结合

·        将含有目标抗体的样品（血清、腹水、细胞培养上清等）用结合缓冲液适当稀释（建议总蛋白浓度不超过5 mg/mL），与预处理后的磁珠混合。

·        室温（20–25°C）旋转孵育15–30分钟，或4°C旋转孵育1–2小时，以确保抗体充分结合。对于低丰度样品，可适当延长孵育时间至4°C过夜。

·        磁力分离，收集上清（可用于检测结合效率或Flow-through分析）。

步骤三：洗涤

·        加入结合缓冲液（磁珠体积的5–10倍），涡旋重悬磁珠，磁力分离后弃上清。

·        重复洗涤3–5次。对于IP/Co-IP实验，建议最后一次洗涤使用含0.05% Tween-20的PBS或高盐缓冲液（含500 mM NaCl的PBS）以进一步降低非特异性结合。

·        洗涤完成后，尽量吸净残留缓冲液，但注意不要吸走磁珠。

步骤四：洗脱

·        加入洗脱缓冲液（0.1 M甘氨酸-盐酸，pH 2.5–3.0），体积为沉降磁珠体积的2–5倍。

·        涡旋重悬后室温孵育5–10分钟，期间偶尔轻弹混匀。

·        磁力分离，将洗脱液转移至预先加入中和缓冲液（1 M Tris-HCl，pH 8.5，体积为洗脱液的1/10）的离心管中，迅速混匀以中和pH。

·        如需提高回收率，可重复洗脱1–2次，合并洗脱液。

·        洗脱后的抗体可直接用于下游实验，或经透析、超滤置换至所需缓冲液中。

5.3  磁珠再生与重复使用

洗脱后的磁珠如需重复使用，按以下步骤再生：

·        用10倍磁珠体积的0.1 M甘氨酸-盐酸（pH 2.5）洗涤1次，去除残留结合蛋白。

·        用10倍体积PBS（pH 7.4）洗涤2次，恢复中性环境。

·        重悬于储存缓冲液（1×PBS含20%乙醇）中，2–8°C保存。

注意：重复使用次数取决于样品复杂度和操作条件，一般建议不超过5次。对于高价值或高纯度要求的样品，建议使用新鲜磁珠。

六、   常见问题及解决方案

本章针对使用rProtein A/G Agarose MagBeads过程中可能遇到的常见问题进行系统梳理，并提供可操作的排查思路和解决方案。建议按"现象判断→原因排查→方案实施"的顺序逐步处理。

6.1  抗体结合量低 / 回收率低

6.2  非特异性吸附高 / 背景高 / 纯度低

6.3  磁珠聚集 / 结块 / 分散不良

6.4  洗脱不彻底 / 目标蛋白仍留在磁珠上

6.5  洗脱抗体失活 / 活性降低 / 聚集

6.6  磁珠残留于洗脱样品中

6.7  IP实验中阴性对照有信号 / 信噪比低

6.8  重复使用后结合量显著下降

七、   储存与稳定性

7.1  储存条件

·        收到产品后请立即置于2–8°C冰箱保存，切勿冷冻。

·        产品以25%（v/v）悬浮液形式供应，储存缓冲液为1×PBS（pH 7.2–7.4）含20%乙醇。

·        储存期间磁珠会自然沉降，使用前需充分混匀。

·        避免长时间暴露于室温或高温环境；避免阳光直射。

7.2  稳定性

·        未开封产品在2–8°C条件下保质期为自发货之日起12个月。

·        开封后如妥善保存（2–8°C、无菌操作、避免污染），可稳定保存6个月以上。

·        产品可耐受常规洗脱条件（0.1 M甘氨酸-HCl，pH 2.5，室温30 min内），不影响后续结合性能。

·        短期（<1周）置于室温不影响产品性能，但不建议长期室温存放。

7.3  安全注意事项

·        本产品含20%乙醇，使用时注意远离火源。

·        操作时请佩戴实验手套、护目镜和实验服，避免接触皮肤和眼睛。

·        如不慎接触皮肤，立即用大量清水冲洗；如接触眼睛，立即用清水冲洗15分钟并就医。

·        废弃磁珠请按实验室生物废弃物相关规定处理，不可直接排入下水道。

·        本产品仅供科研使用，不可用于人体、临床诊断或治疗。

八、   订购信息

注：以上规格为常规包装，如需其他规格或定制服务，请联系销售代表。大宗采购可享受优惠价格。

九、   联系方式

销售与技术支持热线：17302508337（微信同号）

官方网站：www.qianzhusong.com

我们致力于为生命科学研究和生物制药领域提供高品质的亲和纯化介质、层析填料和实验室耗材。公司拥有自主研发和生产能力，产品覆盖蛋白纯化、抗体纯化、核酸提取、磁珠试剂等多个系列，可根据客户需求提供定制化产品和技术服务。

如您在产品使用过程中有任何疑问或需要技术支持，请随时联系我们。我们的技术团队将在24小时内为您提供专业的解答和解决方案。

原装未开封填料 4‑8 ℃储存有效期 12 个月；规范再生条件下填料可重复使用≥20 次。