1 产品简介

      耐碱蛋白A琼脂糖磁珠是一种高性能磁性分离介质，专为抗体和Fc融合蛋白的高效纯化而设计。本产品以交联琼脂糖磁珠为基质，通过环氧基共价偶联技术将基因工程改造的耐碱重组蛋白A牢固固定于微球表面，形成直径约45-100μm的超顺磁性微粒。

      与传统蛋白A介质相比，本产品的核心突破在于其卓越的耐碱性能。通过蛋白结构域改造，配体可耐受0.1-0.5M NaOH的强碱性条件，经40次重复使用和碱清洗后仍能保持80%以上的结合能力。这一特性极大降低了内毒素污染和批次间交叉污染风险，显著延长了介质使用寿命，为抗体药物研发、免疫沉淀和诊断试剂生产提供了经济高效的纯化解决方案。

     本产品适用于从多种生物样本（如细胞培养上清、腹水、血清及粗提物）中快速纯化抗体，特别适合自动化高通量筛选平台，无需离心操作，30分钟内即可完成抗体纯化流程。

2 产品特性

2.1 核心性能优势

• 高结合载量：磁珠具有超大比表面积和优化的配基密度（8-10 mg蛋白A/mL磁珠），对人或动物IgG的结合能力≥40 mg/mL，一步纯化即可获得纯度>90%的抗体。

• 卓越耐碱性：耐受0.1-0.5 M NaOH在位清洗(CIP)，可重复使用40次以上，显著降低使用成本。耐碱性能经加速测试验证：在0.5M NaOH中暴露160小时后结合能力仍保持稳定，而常规产品48小时后即下降50%。

• 快速磁响应：超顺磁性设计实现≤45秒的快速磁分离，比传统离心操作节省40%时间，特别适合高通量自动化平台（如KingFisher）。

• 低非特异吸附：表面经亲水修饰和封闭处理，有效降低杂蛋白、脂类及DNA的非特异性吸附，洗脱样品背景低。

• 广泛兼容性：可结合人IgG1/IgG2/IgG4、小鼠IgG2a/IgG2b/IgA、兔IgG及含Fc标签的重组蛋白，适用样品包括CHO/293细胞上清、杂交瘤上清、腹水及血清。

2.2 技术参数

表：耐碱蛋白A琼脂糖磁珠技术规格

3 应用方向

3.1 抗体与重组蛋白纯化

本产品专为各类IgG抗体的快速纯化而优化，可高效处理多种生物样品：

• 细胞培养上清：适用于293、CHO细胞及杂交瘤细胞表达的单克隆抗体捕获，载量达40 mg HIgG/mL磁珠，回收率>90%。

• 血清与腹水：一步纯化即可从动物腹水中分离高纯度抗体，经SDS-PAGE和体积排阻色谱验证纯度>90%。

• Fc融合蛋白：特异性结合含Fc标签的重组蛋白，洗脱条件温和，保持蛋白活性。

3.2 免疫沉淀与共沉淀(IP/Co-IP)

• 快速高效：10分钟完成抗体结合，30分钟内完成完整IP流程，比传统琼脂糖珠节省40%时间。

• 高特异性：低非特异吸附特性确保靶蛋白的高纯度富集，尤其适用于低丰度抗原的检测。

• 兼容多种样品：适用于细胞裂解物、组织提取液等复杂样本。

3.3 染色质免疫沉淀(ChIP)

• 温和分离：磁分离技术避免机械剪切力，保持DNA-蛋白复合物完整性。

• 高灵敏度：可检测低拷贝数靶点，适用于转录因子结合位点研究。

4 操作流程

4.1 标准抗体纯化流程

以下流程以纯化1 mL人血清为例（图示见附录）：

1. 样品预处理
   取100 μL血清加入900 μL结合缓冲液(Binding/Washing Buffer, pH 7.4)，混匀后离心去除沉淀。

2. 磁珠活化

• 取100 μL磁珠悬液(25%浓度)置于离心管；

• 磁性分离弃上清，加入1 mL结合缓冲液重悬；

• 重复洗涤2次。

3. 抗体吸附

• 处理后的磁珠中加入预处理的样品；

• 室温翻转混合15分钟（维持悬浮状态）。

4. 磁分离与洗涤

• 磁性分离弃上清；

• 加入1 mL结合缓冲液洗涤3次。

5. 抗体洗脱

• 加入0.5 mL洗脱缓冲液(Elution Buffer, pH 2.5-3.0)，重悬磁珠；

• 翻转混合10分钟；

• 磁分离收集上清（洗脱液立即中和）。

6. 中和与保存

• 洗脱液中加入1/10体积中和缓冲液(Neutralization Buffer)；

• 磁珠用0.1 M NaOH清洗10分钟后，储存于20%乙醇。

4.2 关键操作要点

• 磁珠用量优化：

• 高浓度样品(>150 μg/mL)：磁珠体积=1.2×（样品抗体总量/磁珠载量）

• 低浓度样品(<70 μg/mL)：增至3倍磁珠量。

• 洗脱效率提升：

• 洗脱缓冲液pH≤2.8，离子强度≥0.5 M NaCl；

• 抗体浓度控制在0.6-1.2 mg/mL更佳。

5 常见问题解答

5.1 如何提高抗体结合效率？

• 确认抗体类型：人IgG1/IgG2/IgG4、小鼠IgG2a/IgG2b结合效率更佳。

• 优化结合条件：

• 延长孵育时间至30-120分钟；

• 提高缓冲液pH至8-9；

• 降低离子强度（25-100 mM NaCl）。

5.2 如何降低免疫沉淀背景？

• 预清除处理：样品先与裸磁珠孵育，去除非特异吸附组分；

• 分步结合法：

• 先使抗体与抗原在溶液中形成复合物；

• 再加入磁珠捕获复合物，减少磁珠与样品的接触时间；

• 严格洗涤：

• 采用高盐缓冲液（如含500 mM NaCl的TBS）；

• 添加0.05% Tween-20。

5.3 抗体洗脱困难如何解决？

• 调整洗脱参数：

• 降低pH至2.0-2.5（盐酸甘氨酸或柠檬酸缓冲液）；

• 添加离液剂（如2-3 M MgCl₂）；

• 延长洗脱时间至15分钟；

• 竞争性洗脱：

• 使用含Fc片段的多肽竞争洗脱（保持抗体活性）；

• 立即中和：

• 洗脱液中加入1/10体积1 M Tris-HCl (pH 8.5)。

5.4 磁珠再生与保存

• 常规再生：

• 使用0.1 M NaOH清洗10分钟，重复使用可达40次；

• 深度再生：

• 每5次使用后，用1% Triton X-100处理10分钟，清除疏水性杂质；

• 长期保存：

• 2-8℃储存于20%乙醇，避免冷冻或干燥。

6 订购信息

6.1 产品规格与包装

表：产品规格与包装信息

6.2 保存与运输

• 保存条件：2-8℃保存，避免冷冻，有效期24个月；

• 运输方式：冷链运输（冰袋或干冰）。

6.3 技术支持与服务

• 应用支持：免费提供实验方案优化及技术咨询；

• 定制服务：可提供配基密度、粒径及磁珠浓度的定制；

• 批量订购：大包装(>100 mL)享专属折扣。

7  免责声明

        本产品仅限于科研使用，不可用于诊断或治疗用途。实际性能可能因实验条件而异，建议用户进行预实验优化参数。

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