产品描述
预装柱特点
预装柱柱体由生物相容性聚丙烯制成,不会与生物分子发生相互作用。滤膜孔径经过优化,可直接在柱上加载超声波处理的未澄清裂解液,而不会造成背压问题或介质泄漏。柱体配有入口的密封件和出口的快拆端。表1列出了预装柱的特性。
注意:预装柱不能打开或重新填充;确保适配器紧固以防止泄漏。
表 1 预装柱的特点。
柱子体积 | 1 mL,5 mL,20mL |
柱子尺寸 | 7.8 × 25 mm (1 ml); 15.8× 27 mm (5 ml) ; 15.8 × 100 mm (20 ml) |
更大流速 | 1 mL: 4 mL/min, 5 mL: 20 mL/min, 20 mL: 4 mL/min, |
推荐流速 | 1 mL: 1 mL/min, 5 mL: 5 mL/min, 20 mL: 1 mL/min, |
更大背压 | 3 bar (0.3 MPa) |
填料特性
谷胱甘肽亲和层析柱是专为纯化使用谷胱甘肽S转移酶(GST)标签蛋白、其他谷胱甘肽S转移酶和谷胱甘肽结合蛋白而设计的。使用预装柱可以采用一步法从预处理的细菌裂解物中纯化GST标签蛋白。在温和、不破坏蛋白质抗原性和功能的条件下,标签蛋白在低盐缓冲液中被洗脱。
总结合能力约为每毫升培养基10毫克重组GST。动态结合能力将根据流速和样品而变化。如果需要去除GST标签(一种天然存在的Mr 26000蛋白质),可以在预装柱上结合或在洗脱后用适当的位点特异性蛋白酶消化标签蛋白。在预装柱上的切割可消除分离释放蛋白与GST的额外步骤,因为GST标签仍保持结合状态。目标蛋白通过结合缓冲液进行洗脱。
表2 Glutathione Agarose Beads 4FF的特点
基质 | 高交联球形琼脂糖,4% |
平均粒径1 | 90 μm (d50v) |
流速 | 在温度为20°C、柱高1米、柱床高度20厘米的条件下,使用与水在3 bar (0.3 MPa)以下时粘度相同的缓冲液,流速可达700厘米/小时。 |
动态结合载量2 | ≥10mg GST-tagged protein / mL填料 |
pH工作范围 | 3 – 12 |
工作温度 | 4°C – 30°C |
化学稳定性 | 所有常用的水相缓冲液,例如:1 M 乙酸缓冲液(pH 4.0)和6 M 胍盐酸盐,在室温下孵育1小时。 |
储存溶液 | 20%乙醇 |
1 d50v是累积体积分布中的中等颗粒大小。
2 在Tricorn™ 5/100柱中,以1分钟的停留时间、600 cm/h的流速,在50 mM Tris-HCl缓冲液(pH 8.0)中测量的10%穿透时的动态结合能力。
3 短期pH:可以在不影响功能的情况下进行清洁或消毒的pH范围。长期pH:可以在不影响功能的情况下操作的pH范围。