Con A Agarose Beads 4FF （用于糖蛋白纯化）

1. 产品概述

Con A Agarose Beads 4FF 是采用化学偶联技术将高纯度伴刀豆球蛋白 A（Concanavalin A, ConA）共价结合到高度交联的 4% 琼脂糖微球（Sepharose 4FF）上制备而成的亲和层析介质。

ConA 是一种来源于刀豆的四聚体金属蛋白，能特异性识别并结合含有 α-D - 甘露糖、α-D - 葡萄糖和 N - 乙酰葡萄糖胺残基的糖蛋白和糖脂。本产品通过形成稳定的酰胺键实现配基固定，相比传统 CNBr 活化法，具有配基泄漏率极低、稳定性高、活性保留好等显著优势，是糖生物学研究和生物制药生产中糖蛋白纯化的金标准介质。

2. 技术参数

3. 产品特性

3.1 卓越的稳定性

• 采用化学共价偶联，配基与基质结合牢固，长期使用和反复再生无明显配基脱落

• 可耐受 0.5M NaOH 在位清洗（CIP），有效去除微生物和残留蛋白

• 4℃下保存 18 个月后结合载量保留率 > 95%

3.2 高生物活性

• 偶联过程在温和条件下进行，更大程度保留 ConA 的天然构象和糖结合活性

• 所有缓冲液均添加必需的 Ca²⁺和 Mn²⁺，确保 ConA 始终处于活性状态

• 结合载量显著高于传统 CNBr 活化法产品（>25mg vs >20mg 甲状腺球蛋白 /ml）

3.3 优异的批次一致性

• 严格控制活化和偶联工艺参数，批间配基密度差异 < 5%

• 每批产品均经过严格的结合载量和泄漏率检测

• 提供完整的批次分析报告（COA）

3.4 安全环保

• 生产过程不使用剧毒 CNBr，无残留风险

• 符合生物制药 GMP 级生产要求（可提供 GMP 级产品）

4. 应用范围

1. 糖蛋白的分离纯化

• 重组糖蛋白（如抗体、酶、激素）的纯化

• 血清、血浆、细胞培养上清中天然糖蛋白的分离

• 膜糖蛋白和糖脂的提取纯化

2. 糖基化分析

• 糖蛋白糖型分析的样品前处理

• 不同糖基化修饰蛋白的分离

• 糖基转移酶和糖苷酶的活性测定

3. 细胞生物学研究

• 表面表达特定糖链的细胞分离和富集

• 细胞表面糖蛋白的定位和功能研究

• 细胞凝集实验

4. 其他应用

• 酶的固定化

• 多糖和糖复合物的分离

• 病毒和细菌的纯化

5. 使用方法

5.1 准备工作

• 结合缓冲液：20mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM CaCl₂，1mM MnCl₂，pH 7.4

• 洗涤缓冲液：同结合缓冲液

• 洗脱缓冲液：结合缓冲液 + 0.5M 甲基 -α-D - 甘露糖苷（或甲基 -α-D - 葡萄糖苷），pH 7.4

• 再生缓冲液 A：100mM 醋酸钠，500mM NaCl，1mM CaCl₂，1mM MnCl₂，pH 4.0

• 再生缓冲液 B：100mM Tris-HCl，500mM NaCl，1mM CaCl₂，1mM MnCl₂，pH 8.5

⚠️ 重要提示：所有缓冲液中必须添加 1mM CaCl₂和 1mM MnCl₂，禁止使用磷酸盐缓冲液（磷酸盐会螯合金属离子导致 ConA 不可逆失活）。

5.2 装柱

1. 将 Con A Agarose Beads 4FF 从 4℃冰箱取出，室温平衡 30 分钟

2. 轻轻摇匀凝胶悬液，用宽口移液管将凝胶缓慢倒入垂直固定的空层析柱中

3. 打开柱下端出口，让凝胶自然沉降，直至柱床高度稳定

4. 连接层析系统，用 3 倍柱体积的结合缓冲液以 100cm/h 的流速平衡柱子

5. 检查柱床是否均匀，如有气泡或断层，需重新装柱

5.3 上样

1. 将样品用结合缓冲液透析或稀释至电导率与结合缓冲液一致

2. 样品经 0.22μm 滤膜过滤，去除颗粒性杂质

3. 以 50~100cm/h 的流速上样，上样量不超过介质更大结合载量的 80%

4. 收集穿透峰，测定 280nm 吸光度，监测样品穿透情况

5.4 洗涤

1. 上样结束后，用结合缓冲液继续洗涤柱子

2. 洗涤至紫外吸收值回到基线（A₂₈₀<0.01），表明未结合的杂蛋白已被完全去除

5.5 洗脱

1. 改用洗脱缓冲液以 50cm/h 的流速洗脱结合的糖蛋白

2. 分步收集洗脱峰，每管收集 1~2ml

3. 当紫外吸收值回到基线后，停止洗脱

4. 洗脱的糖蛋白应立即透析或稀释，去除高浓度的甲基 -α-D - 甘露糖苷

5.6 梯度洗脱（可选）

对于结合强度不同的糖蛋白，可采用 0~0.5M 甲基 -α-D - 甘露糖苷线性梯度洗脱，实现更好的分离效果。

6. 再生与保存

6.1 柱再生

每次使用后，必须对柱子进行再生处理，以去除强结合的杂质，恢复介质的结合能力：

1. 用 3 倍柱体积的再生缓冲液 A 洗涤柱子

2. 再用 3 倍柱体积的再生缓冲液 B 洗涤柱子

3. 重复上述步骤 3 次（共 6 次洗涤）

4. 最后用 5 倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子，即可进行下一次使用

6.2 在位清洗（CIP）

当柱子出现压力升高、流速下降或结合载量明显降低时，需进行在位清洗：

1. 用 3 倍柱体积的 0.5M NaOH 溶液以 50cm/h 的流速冲洗柱子

2. 室温下浸泡 30 分钟

3. 用 10 倍柱体积的去离子水冲洗至中性

4. 用 5 倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子

⚠️ 注意：在位清洗频率不应超过每月 1 次，过度清洗会导致 ConA 活性下降。

6.3 长期保存

1. 柱子使用完毕后，用 5 倍柱体积的保存缓冲液（20mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM CaCl₂，1mM MnCl₂，20% 乙醇，pH 7.4）洗涤柱子

2. 关闭柱两端的出口，4℃下垂直保存

3. 定期检查保存液是否有浑浊或微生物污染，如有污染应立即丢弃

4. 长期不用时，应每 3 个月更换一次保存液

7. 注意事项

1. 金属离子保护：ConA 的糖结合活性严格依赖 Ca²⁺和 Mn²⁺，所有操作中都不能使用 EDTA、EGTA 等螯合剂。如果样品中含有螯合剂，必须先透析去除。

2. pH 范围：ConA 在 pH<5.6 时会解离为二聚体，但仍保留结合能力；在 pH>9.0 时会发生不可逆变性。

3. 避免干涸：介质在任何时候都不能干涸，否则会导致微球结构破坏和 ConA 失活。

4. 防止冻结：介质不可冻存，冻结会导致琼脂糖微球破裂，影响层析效果。

5. 流速控制：更大流速不应超过 150cm/h，过高的流速会导致柱压升高和微球破碎。

6. 样品处理：上样前必须过滤样品，去除颗粒性杂质，防止堵塞柱子。

7. 安全操作：虽然本产品不含有毒物质，但操作时仍应佩戴手套和护目镜，避免接触皮肤和眼睛。

8. 常见问题解答

Q1：为什么我的糖蛋白不能结合到柱子上？

A1：可能的原因及解决方法：

• 缓冲液中缺少 Ca²⁺或 Mn²⁺：确保所有缓冲液中都添加了 1mM CaCl₂和 1mM MnCl₂

• 使用了磷酸盐缓冲液：立即更换为 Tris-HCl 或 HEPES 缓冲液

• 样品 pH 值过低或过高：调整样品 pH 至 7.0~7.4

• 样品中含有螯合剂：对样品进行透析，去除 EDTA 等螯合剂

• 糖蛋白不含 ConA 识别的糖链：ConA 只识别高甘露糖型和杂合型糖链，不识别复杂型糖链

Q2：洗脱时没有蛋白峰出现？

A2：可能的原因及解决方法：

• 洗脱液中甲基 -α-D - 甘露糖苷浓度过低：提高浓度至 0.5~1.0M

• 洗脱流速过快：降低洗脱流速至 30~50cm/h

• 蛋白结合过强：可尝试在洗脱液中加入 0.5M NaCl 或提高温度至 37℃

• 柱子再生不充分：按照再生步骤重新处理柱子

Q3：柱子压力升高，流速变慢？

A3：可能的原因及解决方法：

• 样品中有颗粒性杂质：上样前必须用 0.22μm 滤膜过滤样品

• 柱子中有微生物污染：进行在位清洗（0.5M NaOH）

• 介质发生沉降压实：倒出凝胶，重新装柱

• 柱头滤膜堵塞：更换柱头滤膜

Q4：配基泄漏率高怎么办？

A4：可能的原因及解决方法：

• 检查是否使用了过高的 pH 或过强的变性剂

• 减少在位清洗的频率和时间

• 如果泄漏率持续升高，说明介质已失效，应更换新的介质

9. 订购信息

联系方式：

• 电话：17302508337（微信同号）

• 网址：www.qianzhusong.com

• 地址：江苏省镇江市扬中市 XX 工业园区 XX 号

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