琼脂糖微球 4B （Agarose Microspheres 4B）

 1. 产品概述

琼脂糖微球 4B 是一款以高纯度琼脂糖为原料，通过反向悬浮乳化 - 可控交联技术制备的 4% 浓度琼脂糖球状层析介质，是生物制药、生物技术研发领域经典的大孔径凝胶过滤（尺寸排阻）层析介质，同时也是大分子靶向亲和层析介质的基础骨架基质。

本产品核心特点为超大孔径、超高排阻极限，可高效分离传统中孔径介质无法处理的超大分子量生物样品，同时保留了琼脂糖基质优异的亲水性、极低非特异性吸附与生物相容性，可更大程度保留病毒颗粒、质粒、超大蛋白复合物等活性样品的天然结构与生物功能。产品采用全封闭 GMP 级生产线生产，批次稳定性优异，可无缝适配实验室科研、中试放大场景，完整的溯源与检验记录可满足生物制药研发申报的合规要求。

2. 核心技术参数

2.1 理化性能参数

2.2 层析性能参数

2.3 化学与 pH 稳定性参数

2.4 储存相关参数

3. 产品核心特性

3.1 超大孔径设计，适配超大分子量样品分离

4% 低浓度琼脂糖基质形成均一可控的超大孔径结构，排阻极限高达 2000 万 Da，是目前可分离分子量范围最广的经典琼脂糖介质之一，完美解决传统中孔径介质（6B/6FF）无法实现的病毒颗粒、质粒 DNA、超大蛋白复合物等样品的分离纯化需求。

3.2 极低非特异性吸附，超高样品回收率

采用高纯度琼脂糖原料制备，基质无带电修饰基团，亲水性极强，对蛋白、多糖、病毒、核酸等生物大分子的非特异性吸附极低，目标样品回收率≥95%，尤其对超大分子活性样品的结构与活性保护效果优异，无明显变性失活风险。

3.3 优异的传质性能，大分子分离分辨率高

超大孔径结构大幅降低了大分子样品的传质阻力，使目标大分子可自由进入颗粒孔道内完成尺寸排阻分离，相较于小孔径介质，对分子量差异≥3 倍的超大分子具有更优异的分离分辨率，可精准实现目标大分子与小分子杂质、杂蛋白的基线分离。

3.4 可修饰性强，是大分子亲和介质的骨架

微球表面富含大量活性羟基，可通过 CNBr、环氧、NHS 等化学方法进行活化修饰，偶联蛋白 A/G、抗原、抗体、凝集素、肝素等配基，制备定制化亲和层析介质。超大孔径可大幅提升大分子配基的偶联效率与目标样品的结合载量，尤其适配病毒、超大蛋白等样品的特异性亲和捕获。

3.5 批次稳定性优异，合规性强

全流程遵循 GMP 规范生产，每批次产品均经过全项性能检测，批次间关键参数偏差≤5%，可实现实验室研发到中试生产的无缝放大；完整的批生产记录、溯源记录与检验报告（COA），可满足生物制药企业研发申报的合规要求。

4. 典型应用领域

4.1 凝胶过滤层析（尺寸排阻色谱，SEC）核心应用

• 超大分子量生物样品分离纯化：专为病毒样颗粒（VLP）、腺相关病毒（AAV）、腺病毒、慢病毒、噬菌体等病毒载体，以及质粒 DNA、基因组 DNA、超大蛋白复合物（IgM、补体复合物、胶原蛋白）、高分子量多糖（透明质酸、肝素、香菇多糖、黄芪多糖）等样品的分离纯化设计，可高效去除宿主细胞蛋白、核酸碎片、小分子杂质等。

• 样品脱盐与缓冲液置换：针对高粘度、大分子量样品的脱盐与缓冲液置换，可快速去除样品中的盐离子、变性剂、小分子抑制剂，避免透析带来的样品稀释、活性损失问题。

• 大分子分子量分级与测定：搭配高分子量蛋白 / 葡聚糖标准品，通过标准曲线法精准测定超大分子的分子量，适配天然产物、生物药的质量研究与表征。

• 生物药聚体去除：用于单抗、双抗、融合蛋白、疫苗等产品中高分子量聚体、 aggregates 的去除，尤其对超大分子量多聚体具有优异的分离效果。

4.2 定制化层析介质基础骨架

本产品是大分子靶向层析介质的基础基质，经活化修饰后可制备：

• 病毒亲和层析介质（肝素亲和、抗体亲和介质等）

• 多糖 / 核酸分离用离子交换层析介质

• 超大分子纯化用疏水层析介质

• 固定化酶载体（尤其适配多糖、蛋白等大分子底物的酶催化反应）

4.3 其他细分应用场景

• 基因治疗与 mRNA 疫苗研发：用于 mRNA 脂质体、LNP、病毒载体的除杂与分级分离；

• 天然产物分离：用于中药、真菌来源的高分子量活性多糖、糖蛋白的分离纯化与分子量分级；

• 血液制品纯化：用于免疫球蛋白 IgM、凝血因子复合物、纤维蛋白原等大分子血液制品的分离纯化；

• 结构生物学研究：用于蛋白复合物、病毒衣壳等超大分子样品的纯化与均一性制备。

5. 标准操作指南

5.1 操作前准备

1. 样品预处理

• 样品需经 0.45μm 滤膜过滤去除颗粒杂质，病毒、质粒等易破损样品可采用低速离心去除沉淀，避免堵塞层析柱筛板与柱床；

• 高黏度样品需用平衡缓冲液稀释至浓度≤5mg/mL，避免峰型展宽、柱压升高、分离效果下降；

• 样品缓冲液体系需与平衡缓冲液一致，避免体系差异导致的样品聚集、分离分辨率降低。

2. 介质预处理

• 冷藏储存的介质提前取出，置于室温（20~25℃）平衡 30min，避免温差产生气泡；

• 轻轻颠倒容器使介质完全混匀，严禁剧烈搅拌、超声、高速离心，避免微球破碎、结构损坏；

• 按目标柱床体积的 1.5 倍量取介质，用平衡缓冲液对介质进行 3 次沉降洗涤，彻底去除储存液中的乙醇，避免乙醇对活性样品的影响。

3. 层析柱准备

• 选用适配的层析柱，柱径与柱床高度比推荐 1:5~1:10，确保分离效果；

• 清洁层析柱，检查柱筛板、接头无破损、无渗漏，确保柱端无死体积，筛板孔径适配介质粒径。

5.2 标准装柱流程（重力沉降法，推荐方法）

重点提醒：本产品机械强度较低，严禁高压装柱、高流速压实，否则会导致柱床塌陷、微球破碎、性能丧失。

1. 将层析柱垂直固定，关闭柱下端出口，加入 1/3 柱体积的平衡缓冲液，排尽筛板与管路中的气泡；

2. 采用连续匀浆法装柱：将预处理后的介质配制成匀浆（介质：缓冲液 = 1:1，v/v），沿柱内壁一次性缓慢、连续加入层析柱中，避免产生气泡与分层；

3. 打开柱下端出口，控制流速为推荐流速的 50%，使介质自然重力沉降，直至柱床高度稳定不变，沉降过程中严禁加压；

4. 柱床沉降稳定后，安装柱上端适配器，调节适配器至紧贴柱床表面，无空隙、无挤压柱床；

5. 用 3~5 倍柱床体积的平衡缓冲液，以推荐工作流速冲洗平衡柱床，直至柱床高度稳定、基线平稳，完成装柱。

装柱完成后，需通过丙酮 / 氯化钠标准品测定理论塔板数与峰不对称因子，确认装柱合格（理论塔板数≥2500/m，峰不对称因子 0.8~1.2）。

5.3 层析分离标准操作

1. 平衡：用 3~5 倍柱床体积的平衡缓冲液，以推荐工作流速平衡层析柱，直至紫外吸收、电导率、pH 值基线平稳。

2. 上样

• 上样体积：分析型分离推荐上样体积≤1% 柱床体积；制备型分离推荐上样体积≤5% 柱床体积；脱盐处理可放宽至 20% 柱床体积；

• 上样流速：推荐为工作流速的 50%，确保超大分子样品与介质充分接触，提升分离效果与回收率。

3. 洗脱

• 采用等度洗脱方式，以平衡缓冲液作为洗脱液，以推荐工作流速进行洗脱，严禁随意提高流速；

• 依据紫外 280nm（蛋白 / 病毒）/260nm（核酸）吸收信号，分段收集洗脱峰，完成目标样品的分离。

4. 再生

• 单次分离完成后，用 2~3 倍柱床体积的高盐缓冲液（如 1.5M NaCl+20mM PB，pH7.4）冲洗柱床，去除非特异性吸附的杂质；

• 再用 3~5 倍柱床体积的平衡缓冲液冲洗柱床，恢复至初始平衡状态，即可进行下一次分离。

5.4 在位清洗（CIP）与消毒

• 适用场景：多次使用后柱压升高、分离分辨率下降、样品交叉污染、长期储存前的消毒处理。

• 标准 CIP 流程（重点适配 4B 基质特性，避免强碱损伤）：

1. 用 1~2 倍柱床体积的纯化水冲洗柱床，去除残留缓冲液与盐离子；

2. 用 2~3 倍柱床体积的0.1~0.5M NaOH 溶液正向冲洗柱床，控制流速为推荐流速的 30%，并在柱内保留 15~30min，严禁高浓度 NaOH 长时间接触，避免基质降解；

3. 用 5~10 倍柱床体积的纯化水冲洗柱床，直至流出液 pH 值为中性；

4. 用 3~5 倍柱床体积的平衡缓冲液重新平衡柱床，即可继续使用；若需储存，置换为 20% 乙醇水溶液。

5.5 柱床维护与保存

• 层析柱使用过程中，严禁超过更大工作压力，避免柱床塌陷、微球破碎；

• 严禁反向冲洗层析柱，避免柱床扰动、分层；

• 短期存放（7 天内）：4~8℃冷藏，柱内充满平衡缓冲液，添加 0.02% 叠氮钠防腐，封闭柱两端进出口；

• 长期存放（＞7 天）：柱内置换为 20% 乙醇水溶液，4~8℃冷藏避光保存，严禁冷冻、严禁干燥。

6. 储存与运输规范

6.1 储存规范

1. 未开封产品：需在 4℃~8℃冷藏、避光、干燥环境下储存，严禁冷冻、严禁高温暴晒、严禁剧烈震荡；

2. 开封后产品：需在无菌环境下操作，使用后及时置换为 20% 乙醇水溶液，密封后 4℃~8℃冷藏储存，避免微生物污染；

3. 严禁将介质干燥脱水、高速离心脱水、高温高压灭菌、高压压实，避免微球结构破坏、性能丧失；

4. 储存过程中，若出现介质霉变、结块、严重变色、颗粒破碎，需立即停止使用。

6.2 运输规范

1. 产品采用冷藏保温箱运输，全程控制温度 2~8℃，避免极端温度，严禁冻结；

2. 运输过程中避免剧烈震荡、倒置、重压，防止包装破损、介质泄漏；

3. 到货后请立即检查包装完整性、产品外观，核对批号、规格、有效期，若出现包装破损、介质冻结、污染等情况，请立即联系供应商。

7. 安全防护与注意事项

7.1 操作安全防护

1. 操作人员需穿戴实验服、一次性手套、护目镜，避免化学品与皮肤、黏膜、眼睛直接接触；

2. 操作强碱、活化试剂等危险化学品时，需在通风橱内进行，严格遵守化学品安全操作规程；

3. 本产品储存液含 20% 乙醇，属于易燃液体，需远离火源、高温热源，严禁明火操作；

4. 若需处理致病性病毒、质粒等样品，需在符合生物安全等级要求的实验室进行，操作后对介质、层析柱、废液进行严格消毒处理。

7.2 应急处理措施

1. 皮肤接触：立即用大量流动清水冲洗接触部位至少 15min，若出现刺激、过敏症状，及时就医；

2. 眼睛接触：立即用大量生理盐水或流动清水冲洗眼睛至少 15min，立即就医；

3. 吸入 / 误食：立即脱离现场至空气新鲜处，误食者严禁催吐，立即就医；

4. 泄漏处理：立即用吸水材料覆盖泄漏物，收集至专用废液容器中，用大量清水冲洗泄漏区域，严禁直接排入下水道。

7.3 废弃物处理

1. 使用后的废弃介质、废液需按照实验室 / 工业危险废物处理规范进行分类处理，严禁随意丢弃、排放；

2. 含致病性生物样品的废弃介质，需经规范灭活消毒后，再按生物安全废物规范处理。

8. 质量控制与批次保证

8.1 全流程质量控制

本产品严格遵循 GMP 生产规范，从原料入厂到成品出厂，执行全流程质量管控：

1. 原料质控：琼脂糖原料需经过纯度、凝胶强度、灰分、重金属、内毒素全项检测，符合内控标准方可入厂；

2. 过程质控：乳化、交联、筛分、洗涤等关键工序执行在线监测，确保关键工艺参数偏差在可控范围内；

3. 成品全检：每批次成品均经过全项性能检测，出具完整的批检验报告（COA），检测项目包括：外观、粒径分布、沉降速度、床体积、pH 值、理论塔板数、峰不对称因子、分离性能、内毒素、微生物限度。

8.2 批次一致性保证

1. 采用固定的生产工艺与设备，每批次生产执行相同的工艺参数，确保批次间关键性能指标偏差≤5%；

2. 保留完整的批生产记录、批检验记录、原料溯源记录，可实现全流程追溯，满足生物制药企业研发申报的合规要求；

3. 可提供定制化批次检测服务，满足客户个性化质控需求。

8.3 合规性声明

本产品符合《中国药典》三部生物制品用层析介质相关要求，符合 USP<661>、EP 3.1.15 相关标准，可用于生物制药研发与中试生产场景。

9. 常见问题（FAQ）与解决方案

10. 技术支持与售后服务

10.1 技术支持

本公司配备专业的层析技术应用团队，可为客户提供全流程技术支持服务，包括：

• 产品选型与超大分子分离方案定制；

• 装柱、层析分离工艺开发与优化；

• 病毒、质粒等特殊样品的纯化工艺支持；

• 产品使用问题排查与解决方案；

• 定制化亲和层析介质开发与制备服务。

10.2 售后服务

1. 产品到货后，若出现包装破损、质量不符、性能不达标等问题，我司将在 24 小时内响应，提供退换货、技术排查等解决方案；

2. 可提供上门技术服务、工艺培训服务（需提前预约）；

3. 可提供完整的批生产记录、COA 报告、稳定性研究数据等申报资料支持，满足生物制药企业研发申报需求。

10.3 联系方式

• 技术咨询热线：17302508337(微信同号)

• 官方网站：www.qianzhusong.com

• 公司地址：江苏省镇江市句容市宝华镇双创大厦1217室

附则

1. 本手册内容仅为产品标准操作指导，客户可根据自身应用场景优化工艺参数；

2. 本手册内容将根据产品升级与技术更新进行修订，恕不另行通知，最新版本请以官方发布为准；

3. 本产品仅用于科研与工业生产用途，严禁用于人体临床诊断、治疗等医疗用途。