一、 产品概述
本产品是将三 (2 - 羧乙基) 膦盐酸盐（TCEP・HCl）通过稳定的酰胺键共价固定于 4% 交联珠状琼脂糖载体上制备而成的固相还原剂，专门用于蛋白质、多肽及其他含二硫键分子的二硫键还原反应。
与传统可溶性还原剂（DTT、β- 巯基乙醇）相比，本产品无需后续凝胶过滤、透析等繁琐步骤即可实现还原样品与还原剂的完全分离，且无异味、稳定性高、不干扰后续巯基反应（如马来酰亚胺交联、碘乙酸标记等），是蛋白质组学、抗体工程、多肽合成等领域的理想工具。
二、 产品特性
高载量：有效功能性 TCEP 浓度＞8μmol/mL 沉降凝胶
宽适用范围：pH 4.0-9.0，温度 0-95℃
兼容性好：兼容大多数缓冲液及变性剂（盐酸胍、SDS 等）
无残留：完全无游离还原剂污染，不干扰后续实验
操作简便：支持批量法、离心柱法、重力流柱法多种操作形式
稳定性优异：4℃密封保存可稳定 12 个月
三、 技术参数
参数 | 规格 |
基质 | 4% 交联珠状琼脂糖 |
粒径 | 45-165μm |
有效 TCEP 载量 | ≥8μmol/mL 沉降凝胶 |
偶联方式 | 羧基 - 氨基共价酰胺键 |
游离 TCEP 残留 | ＜0.01mM |
还原效率 | ≥95%（1mM 胱氨酸，25℃孵育 15 分钟） |
储存条件 | 4℃避光密封保存，严禁冷冻 |
有效期 | 12 个月 |
适用范围 | 蛋白质、多肽及其他含二硫键分子的还原 |
四、 储存与处理
4.1 储存
收到产品后立即置于 4℃冰箱避光保存，严禁冷冻
产品为 50%（v/v）超纯水悬浮液，含 10mM EDTA 作为稳定剂
避免频繁开盖，防止微生物污染和氧化
严禁使用金属器具接触凝胶，应使用塑料或玻璃器具
4.2 使用前准备
使用前将凝胶充分颠倒混匀，使悬浮液均匀
根据实验规模取适量凝胶，剩余凝胶立即密封放回 4℃保存
如需更换缓冲液，可通过离心或抽滤方式洗涤凝胶
五、 操作步骤
5.1 批量法（适用于 20-750μL 样品）
向微量离心管中加入1-2 倍样品体积的混匀凝胶悬浮液
1000×g 离心 1 分钟，弃去上清液
（可选）用样品缓冲液洗涤凝胶 2-3 次：加入缓冲液，短暂涡旋重悬，1000×g 离心 1 分钟，弃上清
加入蛋白质 / 多肽样品，涡旋混匀，室温孵育相应时间（见表 1）
1000×g 离心 1 分钟，收集上清液即为还原后的样品
（可选）用少量缓冲液洗涤凝胶 1 次，合并上清液以提高回收率
表 1 室温下还原蛋白质的推荐孵育时间
样品浓度 | 孵育时间 |
＜0.1mg/mL | 15 分钟 |
0.1-0.5mg/mL | 30 分钟 |
0.5-0.9mg/mL | 45 分钟 |
＞1mg/mL | 60 分钟 |
5.2 离心柱法（适用于 50-750μL 样品，推荐）
向离心柱中加入1-2 倍样品体积的混匀凝胶悬浮液
50×g（约 1000rpm）离心 30 秒，弃去流出液
（可选）用样品缓冲液洗涤凝胶 2-3 次：加入缓冲液，50×g 离心 30 秒，弃流出液
将样品加到凝胶顶部，轻轻混匀，室温孵育相应时间（见表 1）
将离心柱转移至新的收集管中，50×g 离心 1 分钟
收集的流出液即为还原后的样品
注：对于 300-750μL 样品，先按批量法在离心管中孵育，再将凝胶 / 样品混合物转移至离心柱中离心收集。
5.3 重力流柱法（适用于＞250μL 样品）
选择合适尺寸的层析柱，加入至少 2 倍样品体积的凝胶悬浮液
待凝胶自然沉降后，移除底部堵头，排干保存液
（可选）用 2 倍柱体积的样品缓冲液洗涤凝胶
上样，待样品完全进入凝胶床后，盖上底部堵头
室温孵育相应时间（多肽仅需 15 分钟）
移除底部堵头，用样品缓冲液洗脱，收集 0.5-1 倍柱体积的馏分
通过 280nm 吸光度测定确定含蛋白质的馏分
六、 注意事项
金属离子禁忌：Zn²⁺、Cu²⁺、Fe³⁺等二价金属离子会不可逆失活 TCEP，所有试剂均需用超纯水配制，严禁使用金属器具
缓冲液选择：
推荐使用 Tris-HCl、HEPES、MES 等非磷酸盐缓冲液
避免使用磷酸盐缓冲液（PBS），磷酸盐会加速 TCEP 氧化
如必须使用 PBS，应现配现用并加入 10mM EDTA
变性剂使用：大多数蛋白质无需变性剂即可充分还原；对于含内部二硫键的蛋白质，可加入 6M 盐酸胍提高还原效率
严禁使用尿素，尿素会分解产生氰酸盐，与还原生成的巯基反应
防氧化措施：还原后的巯基易重新氧化，应立即进行后续实验；样品缓冲液中加入 5-20mM EDTA 可有效防止氧化
一次性使用：固定化 TCEP 反应后转化为无活性的膦氧化物，无法再生，建议单次使用后丢弃
七、 常见问题与解决方案
问题 | 可能原因 | 解决方案 |
样品还原不完全 | 凝胶用量不足 | 增加凝胶用量至样品体积的 2 倍 |
孵育时间不足 | 延长孵育时间，或 37℃孵育 | |
二硫键无法接触 | 在缓冲液中加入 6M 盐酸胍 | |
凝胶活性下降 | 检查产品有效期，避免金属接触和氧化 | |
样品回收率低 | 使用了批量法 | 改用离心柱法 |
凝胶非特异性结合 | 提高缓冲液盐浓度（0.1-0.5M NaCl），或加入 10-30% DMSO | |
洗脱不充分 | 增加洗脱体积，或分多次洗脱 | |
凝胶流速慢 | 柱床中有气泡 | 重新装柱，避免气泡产生 |
样品中有沉淀 | 上样前离心去除沉淀 | |
后续实验受干扰 | 有游离 TCEP 残留 | 增加洗涤次数，确保彻底去除未偶联的 TCEP |
缓冲液中含有巯基化合物 | 使用不含巯基的缓冲液 |
八、 订购信息
公司名称：江苏千株松生物科技有限公司
联系电话：17302508337（微信同号）
免责声明
本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断、治疗或人类及动物食用。本公司保证产品在有效期内符合所公布的技术指标。对于因使用不当或超出适用范围导致的任何损失，本公司不承担责任。
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