肝素琼脂糖凝胶中压层析预装柱（1ml，5ml和20ml）

1 产品概述

本系列预装柱采用Heparin Agarose Beads 6FF 亲和层析介质预先装填而成，专为肝素依赖性生物分子的快速纯化设计，广泛应用于抗凝血酶 III、凝血因子、DNA 结合蛋白、脂蛋白、核酸作用酶及类固醇受体的分离纯化。

产品核心优势

• 即开即用：工厂标准化装填，柱床均匀致密，批次间一致性优异，无需用户自行装柱，大幅节省实验时间

• 多规格覆盖：提供 1ml、5ml、20ml 三种标准规格，适配实验室小规模筛选、中试放大及小规模生产需求

• 高机械强度：采用 6% 高刚性交联琼脂糖基质，可耐受高流速操作，缩短纯化周期

• 高结合载量：配体密度 > 4mg/mL 介质，保证目的蛋白的高回收率

• 化学稳定性好：pH 稳定范围 4-12，兼容多种常用清洗和再生试剂

2 核心技术参数

2.1 通用性能参数

2.2 规格参数对比

注：更大上样量基于抗凝血酶 III 测定，实际载量因目的蛋白性质、样品纯度及操作条件而异。

3 溶液配制

所有缓冲液配制完成后，必须经 0.45μm 滤膜过滤并脱气后方可使用，避免杂质堵塞筛板或气泡进入柱体影响分离效果。

• 结合 / 洗杂缓冲液：50mM Tris-HCl，10mM 柠檬酸钠，pH 7.4

• 洗脱缓冲液：50mM Tris-HCl，10mM 柠檬酸钠，1M NaCl，pH 7.4

• 再生缓冲液：0.1M NaOH 溶液、6M 盐酸胍溶液、8M 尿素溶液、70% 乙醇溶液

• 保存液：20%（v/v）乙醇水溶液

4 样品制备

样品预处理是保证纯化效果和延长柱体使用寿命的关键步骤：

1. 澄清过滤：所有样品上样前必须经 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤；若样品浑浊，先于 4℃、12000rpm 离心 10 分钟，取上清液过滤。

2. 缓冲体系匹配：确保样品 pH 值为 7.0-7.6，离子强度与结合缓冲液一致。

• 血清、腹水、细胞培养液等可直接用结合缓冲液稀释；

• 高盐或 pH 偏离较大的样品，需用结合缓冲液透析过夜（透析液体积为样品的 100 倍）或通过脱盐柱置换缓冲液。

3. 上样量控制：根据柱体规格和目的蛋白含量调整上样体积，避免过载导致纯度下降。

5 纯化操作流程

5.1 使用前准备

1. 将预装柱从 4℃冰箱取出，室温平衡 15-30 分钟，避免柱内产生冷凝气泡。

2. 检查柱体外观，确认无漏液、柱床无干裂、无气泡及分层现象。

3. 拧下柱体上下端的保护帽，保留保护帽以备后续保存使用。

4. 将柱体连接至中压色谱系统，注意流向（柱体箭头方向为流动相方向，严禁反向高压冲洗）。

5.2 标准纯化步骤

重要提示：洗脱过程中可根据目的蛋白性质调整 NaCl 浓度梯度，以获得更高的分离度；若无需立即重复使用，完成柱后保存步骤后置于 4℃冰箱储存。

5.3 纯化效果检测（SDS-PAGE）

取原始样品、流出液、洗杂液和洗脱液组分，进行 SDS-PAGE 电泳分析，判定目的蛋白的纯度和回收率。

关键注意事项：若样品中含有盐酸胍，会中和 SDS 电荷导致电泳沉淀。此类样品需先透析处理：用 PBS 作为透析液，透析 2 次，每次 1 小时，透析液体积为样品的 100 倍。

6 柱体清洗与再生

随着使用次数增加，非特异性结合的蛋白和聚集物会导致柱压升高、结合载量下降，此时需进行清洗再生。根据污染类型选择对应方法：

6.1 常规再生（每次使用后推荐）

用 3 倍柱体积的 0.1M NaOH 溶液冲洗柱体，接触时间不超过 15 分钟，立即用 5 倍柱体积的 PBS（pH 7.4）冲洗至中性，再用结合缓冲液平衡。

6.2 深度再生（污染较严重时）

1. 去除沉淀 / 变性蛋白：用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍或 8M 尿素溶液冲洗，立即用 5 倍柱体积的 PBS 冲洗至中性。

2. 去除疏水性杂质：用 3 倍柱体积的 70% 乙醇溶液冲洗，立即用 5 倍柱体积的 PBS 冲洗至无残留。

再生限制：严禁使用 1% Triton X-100 等表面活性剂清洗预装柱，以免导致柱床塌陷；再生总次数不超过 10 次，超过后柱效会显著下降。

7 注意事项与常见问题

7.1 通用注意事项

1. 储存要求：严禁冷冻或高温保存，否则会破坏琼脂糖基质结构；长期不用时，需将柱体充满 20% 乙醇水溶液，拧紧保护帽，置于 4℃密封保存。

2. 操作限制：严禁超过更大操作压力和流速；严禁反向高压冲洗柱体；严禁拆开柱体取出填料。

3. 避免干柱：使用过程中切勿让柱床干涸，否则会导致柱床开裂、柱效不可逆下降。

4. 试剂兼容性：避免使用强氧化剂、高浓度有机溶剂（如丙酮、乙腈）处理柱体，以免导致配体脱落。

7.2 常见问题及处理

8 订购信息

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