5x Bradford蛋白浓度测定试剂盒
产品货号：QS05002
产品规格：50mL，100mL
产品简介:
Bradford法的检测原理是考马斯亮蓝(Coommassie Brilliant Blue)G-250与蛋白质的碱性和芳香族氨基酸特别是精氨酸(Arginine)在酸性介质中结合后，溶液转变为蓝色，溶液最大吸收峰从465nm迁移到595nm，颜色的变化与蛋白质浓度成正比。因此，可通过检测595nm处的吸光度对溶液中蛋白质浓度进行测定。
产品组成：
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
QS05002 | 5x Bradford Reagent | 100 mL |
QS03011 | 牛血清白蛋白（BSA）标准溶液（5mg/mL） | 1 mL |
QS05023 | 1x PBS溶液 | 50 mL |
使用说明（仅供参考）:
一、 微孔酶标仪法
1、完全溶解蛋白标准品，取10 μL，稀释至250μL，使终浓度为0.2mg/mL。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2、5x G250染色液使用前请上下颠倒数次，取1mL 5x G250染色液，加入4mL纯化水，混匀成G250工作液，此G250工作液可在4℃保存一周。
3、将标准品按0、2、4、6、8、12、16、20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。
4、将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准1/2后。
5、各孔加入200微升稀释后的G250工作液，室温放置3-5分钟。
6、用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7、根据标准曲线计算出样品的浓度。
二、 分光光度计法
如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。
步骤如下：
1、取八支（或者更多）干净的10mL离心管，标记上号。
2、取100μL BSA加入PBS 2.4mL稀释至终浓度为0.2mg/mL。
3、5x G250染色液使用前请上下颠倒数次，取1mL 5x G250染色液，加入4mL纯化水，混匀成G250工作液，此G250工作液可在4℃保存一周。
4、按下表加入试剂（以每孔5mL计，多余的用来清洗比色皿）
离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7（样管1） |
标准品BSA | 0μL | 100μL | 200μL | 300μL | 400μL | 500μL | 500μL |
PBS | 500μL | 400μL | 300μL | 200μL | 100μL | 0μL | 0μL |
G250工作液 | 5mL | 5mL | 5mL | 5mL | 5mL | 5mL |
5、反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD值。
离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | ……… |
加染色剂（分钟） | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | ……… |
测OD值（分钟） | 3 | 5 | 7 | 9 | 11 | 13 | 15 | 17 | ……… |
保存条件：
5x Bradford Reagent和PBS溶液4℃贮存；牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存；。
本试剂盒有效期1年。
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0511-80277669
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