5x Bradford蛋白浓度测定试剂盒（QS05002）

5x Bradford蛋白浓度测定试剂盒

产品货号：QS05002

产品规格：50mL，100mL

产品简介:

Bradford法的检测原理是考马斯亮蓝(Coommassie Brilliant Blue)G-250与蛋白质的碱性和芳香族氨基酸特别是精氨酸(Arginine)在酸性介质中结合后，溶液转变为蓝色，溶液最大吸收峰从465nm迁移到595nm，颜色的变化与蛋白质浓度成正比。因此，可通过检测595nm处的吸光度对溶液中蛋白质浓度进行测定。

产品组成：

使用说明（仅供参考）:

一、 微孔酶标仪法

1、完全溶解蛋白标准品，取10 μL，稀释至250μL，使终浓度为0.2mg/mL。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。

2、5x G250染色液使用前请上下颠倒数次，取1mL 5x G250染色液，加入4mL纯化水，混匀成G250工作液，此G250工作液可在4℃保存一周。

3、将标准品按0、2、4、6、8、12、16、20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。

4、将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准1/2后。

5、各孔加入200微升稀释后的G250工作液，室温放置3-5分钟。

6、用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。

7、根据标准曲线计算出样品的浓度。

二、 分光光度计法

如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。

步骤如下：

1、取八支（或者更多）干净的10mL离心管，标记上号。

2、取100μL BSA加入PBS 2.4mL稀释至终浓度为0.2mg/mL。

3、5x G250染色液使用前请上下颠倒数次，取1mL 5x G250染色液，加入4mL纯化水，混匀成G250工作液，此G250工作液可在4℃保存一周。

4、按下表加入试剂（以每孔5mL计，多余的用来清洗比色皿）

5、反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD值。

保存条件：

5x Bradford Reagent和PBS溶液4℃贮存；牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存；。

本试剂盒有效期1年。