Streptactin XT蛋白对 Strep-Tag II 和Twin Strep-tag II的亲和能力比链霉亲和素要强，且分离纯化条件温和，在生理条件下即可实现蛋白的分离纯化；此外，Strep-Tag II 为 8 个氨基酸的小标签（WSHPQFEK），由于标签小，仅为 1 kDa 左右，不影响融合后蛋白质的结构和功能。这些温和的纯化参数能保存蛋白质的生物活性，并仅经一步提取即可产出超过 99%的纯度。将 Streptactin XT蛋白共价偶联到琼脂糖微球表面，制备了一种专为高效、快速分离纯化Strep-tag II 蛋白的一种新型功能化材料，实现并搭建了提取速度、提取量及纯度兼得的蛋白纯化平台。
表1、Streptactin XT Agarose Beads 4FF产品特点
基质 | 4%高刚性琼脂糖 |
粒径范围 | 45-165µm |
配基 | Streptactin XT蛋白 |
配基密度 | ~5 mg /mL 填料 |
结合载量 | ~10 mg Strep-tag II 或 Twin-Strep-tag蛋白 /mL 填料 |
流速 | ≦500cm/h |
操作压力 | ≤0.3MPa |
贮存溶液 | 20%乙醇 |
贮存温度 | 4-8℃ |
平衡/洗杂溶液 ：10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
洗脱溶液：100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 50 mM biotin, pH 8.0
再生溶液：3 CV 纯水, 3 CV 50 mM NaOH, 3 CV 纯化
本产品手册提供以下三种样品的处理方法：
(1) 大肠杆菌、酵母等细胞内表达蛋白：表达细胞用适量 Binding Buffer 稀释，加入蛋白酶抑制剂（如终浓 度为 1 mM 的 PMSF）；冰浴超声裂解细胞，即为粗蛋白样品。如果样品过于粘稠，可根据需要在粗 样品中加入适量核酸酶，在冰上放置 30 min，以降解核酸。另外，如果目标蛋白含量较低，建议将粗 蛋白样品进行离心操作。
(2) 胞外表达蛋白：取胞外表达上清，用等量 Binding Buffer 稀释平衡，即为粗蛋白样品。
(3) 动物细胞胞内表达蛋白：取适量动物细胞，用适量 PBS 洗涤 1 次，弃上清；用适量含 1%（v/v） Triton X-100 或 1%（v/v）NP-40 的 Binding Buffer 重悬；加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为 1 mM 的 PMSF）；置于冰上 10 min，即为粗蛋白样
以下方法仅供使用1ml预装柱的客户参考:
1、 采用液滴对液滴（避免引入气泡）的方式将柱子连接到层析系统上。
2、 用纯化水以1ml/min的流速冲洗5个CV。
3、 用平衡液以1ml/min的流速冲洗10个CV。
4、 将样品以0.3ml/min的流速上样。
5、 用平衡液以1ml/min的流速冲洗至紫外吸收值平稳（10-15个CV）。
6、 用洗脱液以1ml/min的流速洗脱10CV。
7、 用纯化水以1ml/min的流速冲洗5个CV。
8、 用20%乙醇以1ml/min的流速冲洗5个CV。
以下方法仅供使用重力柱的客户参考：
1、将装填好的 重力柱用 5 倍柱体积平衡液进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲液体系下，重复 2-3 次。
2、将样品加到平衡好的重力柱中，可以反复上样增加结合效率。
3、用 10-15 倍柱体积的洗杂液进行洗杂。
4、使用 5-10 倍柱体积的洗脱液洗脱，分段收集，可以得到高纯度和高浓度的蛋白。
以下方法仅供使用孵育法纯化的客户参考：
1、根据纯化样品量，取适量纯化介质加入离心管中，1000 rpm 离心 1 min，弃去清；也可加入重力柱中，流干保护液。
2）向离心管中加入 5 倍介质体积的平衡液清洗介质，1000 rpm 离心 1 min，弃去上清。
3）加入样品，封闭离心管或重力柱管，4℃振荡孵育 2-4 h 或者 37℃孵育 30 min-2 h。
4）孵育结束后，1000 rpm 离心 1 min，弃上清，或过滤收集介质，上清保留作为流穿，用于电泳鉴定。
5）用 5 倍介质体积的洗杂液清洗介质，1000 rpm 离心 1 min，去上清。
6）加入 3-5 倍柱体积的洗脱液进行洗脱，室温孵育 5 min，1000 rpm 离心 1 min 或重力柱管收集洗脱液，可重复 2-3 次。
试剂 | 浓度 |
氯化钠 | 5 M |
氯化镁 | 1 M |
EDTA | 50 mM |
β-巯基乙醇 | 45 mM |
盐酸胍 | 4 M |
尿素 | 6 M |
吐温-20 | 2% |
SDS | 0.09% |
甘油 | 25% |
乙醇 | 10% |
咪唑 | 250 mM |
蛋白纯化流程的优化 以上操作流程适用于大部分 Strep-Tag II 标签蛋白的纯化，根据不同Strep-Tag II融合蛋白与填料的结合性能不同，用户可以从以下几个方面对纯化流程进行优化，以提高目标蛋白的回收率和纯度。
1. 提高目标蛋白回收率的参考方法：
(1) 延长蛋白溶液与填料孵育的时间或者反复上样多次；
(2) 添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；
(3) 增加填料用量；
(4) 延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数；
2. 提高目标蛋白纯度的参考方法：
(1) 在纯化过程中添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；
(2) 延长洗涤的时间，增加洗涤次数；
产品名称 | 货号 |
Streptavidin Agarose Beads 6FF | QS01014 |
Streptactin Agarose Beads 4FF | QS01015 |
Streptactin XT Agarose Beads 4FF | QS01031 |
Dextrin Agarose Beads 4FF | QS01013 |
Glutathione Agarose Beads 4FF | QS01012 |
rProtein A/G Agarose Resins4FF | QS01011 |
0511-80277669
客服1 
客服2