Lysine Agarose Beads 4FF (QS01058)

一、       产品描述

Lysine Agarose Beads 4FF是一类预活化树脂，其纯化原理在于可以通过与巯基或者氨基的反应实现抗原的固定化，进而利用抗原抗体的特异性反应对免疫血清中的抗体进行高效纯化，是多克隆抗体生产中不可缺少的纯化介质。

表1  Lysine Agarose Beads 4FF产品性质

二、       纯化案例

与赖氨酸琼脂糖珠4FF结合的蛋白质在生理pH值附近这样做。推荐的结合缓冲液是50 mM磷酸盐缓冲液，pH 7.5。

对于纤溶酶原的纯化，建议采用以下程序:

1、用5倍体积的结合缓冲液，50mM磷酸盐，pH 7.5平衡填料。

2、加入样品。最多可加入10倍填料体积的血清。样品加入后，用结合缓冲液洗涤填料，直到基线稳定。

3、在结合缓冲液中加入0.5 M的氯化钠，洗脱松散或非特异性结合的物质。

4、用0.2 M ε-氨基己酸在蒸馏水中洗脱纤溶酶原。

5、用至少5倍体积的结合缓冲液重新平衡介质。建议用0.2 M ε-氨基己酸在50 mM磷酸盐缓冲液中洗涤，pH为7.5，含1 M NaCl。

三、       洗脱

Lysine Agarose Beads 4FF是一种对多种生物分子具有亲和力的基团特异性吸附剂。一些蛋白质由于其结构与配体相似而具有生物特异性相互作用，而另一些蛋白质通过静电相互作用以不太特异性的方式结合。

•特异性结合的生物分子，如纤溶酶原，可以通过竞争洗脱。对配体或靶分子使用竞争剂，

例如，缓冲液中的ε-氨基己酸将洗脱特异性结合的物质。纤溶酶原通常用0.2 M ε-氨基己酸洗脱。可以使用步进梯度或连续梯度。

•结合特异性较低的生物分子可以通过增加离子强度来洗脱。在盐浓度为2 M或更少的NaCl时，洗脱通常是完全的。可以使用步进梯度或连续梯度。

•洗脱也可以实现使用温度梯度。例如rRNA对赖氨酸琼脂糖珠4FF的亲和力受到温度的影响。随着温度的降低，需要更高浓度的盐来洗脱每一种RNA。

四、       再生

根据样品的性质，Lysine Agarose Beads 4FF可以通过用5倍体积交替的高pH (0.1 M Tris-HCl, 0.5 M NaCl, pH 8.5)和低pH (0.1 M乙酸钠，0.5 M NaCl, pH 4.5)缓冲液洗涤填料再生再利用。此循环应重复3次，然后用至少5倍体积的结合缓冲液重新平衡。

如果在色谱中使用了洗涤剂或变性剂，这些也可以在洗涤缓冲液中使用。

纤溶酶原纯化后，用几倍体积的50 mM磷酸盐缓冲液（pH 7.5，含1 M NaCl和0.2 M ε-氨基己酸）洗涤再生填料。

核酸纯化后，用至少5倍体积的50 mM磷酸盐缓冲液（pH为7.5，含2m NaCl）洗涤填料。

五、       清洗

在某些样品纯化过程中，变性蛋白质或脂类等物质在再生过程中不会被洗脱。这些可以通过用洗涤剂溶液(例如0.1% Triton X-100)在37°C下洗涤一分钟来去除。立即用至少5倍体积的结合缓冲液重新平衡填料。

六、       储存

填料应保存在20%乙醇中，4-8°C储存。

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