2022-05-08 09:48:26如何利用Strep-Tactin系统进行蛋白的表达和纯化(一)
Strep-tagII是一种短肽(8个氨基酸,WSHPQFEK),与strep-tactin(一种工程链酶亲和素)具有高选择性结合。Strep-tag II与strep-tactin的结合亲和力(Kd=1µM)比与streptavidin的结合亲和力高近100倍。该技术允许在生理......
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Strep-tagII是一种短肽(8个氨基酸,WSHPQFEK),与strep-tactin(一种工程链酶亲和素)具有高选择性结合。Strep-tag II与strep-tactin的结合亲和力(Kd=1µM)比与streptavidin的结合亲和力高近100倍。该技术允许在生理......
了解详情异源蛋白的产生通常伴随着大肠杆菌细胞的生长受损。因此,异源生物合成的调控通常推荐使用启动子,其活性可被抑制子阻断。如果外源蛋白具有细胞毒性,即使少量的外源蛋白产生,也会导致对含有表达质粒的大肠杆菌细胞的剧烈选择。在这种情况下,需要严格抑制启动子。然后通过添加化学诱导剂,以可控的方......
了解详情周质蛋白分泌到位于大肠杆菌外膜和内膜之间的周质间隙。只有当重组蛋白具有被大肠杆菌前导肽酶易位后裂解的N末端信号肽(如OmpA)时,才有可能产生适当的分泌。为了使用Strep-Tactin技术纯化分泌到周质间隙的蛋白,可以使用pASKIBA2, 2C, 4, 4C, 6, 6C, ......
了解详情为了使Strep-tag II/Strep-Tactin有效结合,我们强烈建议对与Strep-tag II融合的蛋白使用柱纯化,而不是进行分批纯化。蛋白质结合在色谱柱上是非常重要的。即使预孵育树脂和裂解物也可能会导致蛋白质产率降低。此外,延长的批次孵育会增加目标蛋白的蛋白水解降解......
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